Cultivarea rujeolei - rubeolei

Video: Virusologul GP Chervonskaya despre rubeola si difterie

Spectru de celule sensibile. etiologie virală de rubeola set Hiro și Tasaka în 1938. În scopul de a izola și de a identifica virusul rubeolei (1962) a durat timp de 24 de ani. De aceea, a fost surprinzator ca virusul rubeolei poate multiplica în mai multe sisteme de celule primare și continuă de diferite origini (SA Demidov și colab., 1968- Parkman e. A., 1964a- Ingalls e. A., 1967- Sordoc 1971 ).
Replicarea virusului este compatibil cu multe tipuri de culturi primare și continue ale omului, maimuță, iepure, bovine, aviară și alte origini. Cu toate acestea, numai într-o cantitate foarte limitată de culturi este prezentat efect citopatic vizibil (CPE) al virusului rubeolei. Chiar și în acele culturi în care este prezentat CPE, depinde adesea de tehnica de cultură, numărul de treceri traversate de virus din tulpina de celule serie de mass-media, serurilor și t. D. Din acest motiv, pentru determinarea cantitativă a virusului a fost dezvoltat printr-o metodă de titrare indirectă utilizând fenomen de interferență. Acestea din urmă se bazează pe proprietatea culturilor infectate cu virusul rubeolei pentru a dobândi rezistență la suprainfecție multe virusuri heterologe. De obicei, utilizat pentru reacția de producere a virusului, are un efect citopatic pronunțat în acest sistem celular. Cel mai adesea acest virus ECHO 11, Coxsackievirus B5 și virusul stomatitei veziculare. Prezența virusului rubeolei în cultură este judecat de drept efect împiedicarea dezvoltării CPP permite virusului.
Dintre culturi primare de celule de origine umană virus CPE manifestare stabilă a fost observată în celulele amnion cultura si tiroida. Un CPE distinct a fost de asemenea observată în kultupax primare derivate din țesuturi de embrioni și adult de iepure (Norrby, 1969).
Cu toate acestea, celulele de cultură primară nu sunt utilizate pe scară largă pentru identificarea și titrarea virusului rubeolei de CPE. Mai convenabil, în acest sens au fost transplantate celule. culturi monostrat acestor celule sunt mai omogene și CPE este prezentat mai constant și clar. Printre celulele derivate de maimuță virusul rubeolei CPP este detectat constant în liniile transplantate AH1, LLC-MK2 și în special Vero. Virusul rubeolei CPP se manifesta in mod constant in celulele transplantate, rinichi de iepure LLC-RK, Rk13 și SIRC cornee de iepure (VV Chebotarev, Norrby 1971, 1969). Celulele utilizate pe scară largă Rk13, care sunt mai des utilizate pentru titrarea virusului nu numai pe CPP, dar, de asemenea, analiza pe placă (RG Desyatskova, OG Andzhaparidze, 1968). (Fig. 1). In prezent, cele mai bune substraturi de celule pentru a produce titruri mari de preparare a virusului și gaz-COP-antigen, precum și pentru titrarea celulelor CPE și analiza pe placă sunt transplantate hamster pui BHK21 rinichi clona 13S și în special acele celule. Folosind aceste celule, în special atunci când se utilizează culturi în suspensie pot fi preparate în titrurile de virus de pana la 10 + 8 TTsD5o / ml, în timp ce în alte celule ale titrurilor de virus culturi rareori TTsDbo peste 106 / ml. AI Rezepova și colab. (1972), pentru cultivarea și titrarea virusului rubeolei de CPE folosit celule pulmonare diploide de embrioni umani. CPE în cultura celulară este detectată la 5-7 zile după infectare.
Interacțiunea virusului și celulelor in vitro. Caracteristici selectate când au fost cultivate in vitro virusul rubeolei in, sunt exprimate slab efect citopatic, tendința de formare a infecției cronice și culturile infectate au exprimat rezistența la suprainfecție cu virusuri heterologe.
In cele mai multe culturi, celulele virusul rubeolei CPP apare de obicei sub forma unei leziuni difuze a monostratului. Pentru virusul rubeolei CPP nu este caracteristic oricărei degenerare rotunde de celule sau formării de. Celulele își pierd în mod normal, forma lor normala, cresterea refrangibility lor. O parte din celule, astfel, separate de sticlă. În unele cazuri, modificări citopatice progres, ceea ce duce la compactare și contracție a nucleului și ruptura ulterioară a celulelor. În unele linii celulare observate incluziuni citoplasmatice de caracter bazofile sau eozinofilica. virusul rubeolei CPP, detectat în celulele Rk13 diferă de cea din alte culturi celulare. In acest sistem celular se confrunta cu un efect citopatic rapid (în medie, 40-50 ore), care este exprimat în apariția leziunilor focale sub formă de monostrat așa-numita mikrofokusov (MB Korolev și colab., 1973- McCarthy, 1969). Spre deosebire de placi observate in alte sisteme de celule și care reprezintă distrugerea celulelor focarele mikrofokusy in celule Rk13 reprezinta proliferante mase de celule având un diametru de aproximativ 0,2 mm.
In culturile de celule infectate cu virusul krasnuZsy apare cu ușurință infecția cronică (Norrby, 1969). virusul rubeolei CPP nu sa răspândit niciodată la toate celulele, și, prin urmare, chiar și în culturile în care cea mai mare parte a monostratului uimit re schimbare de mediu este suficient pentru a provoca o infecție cronică. Persistența virusului este de asemenea observată în celulele în absența totală a CPE vizibil. Infectia cronica cu virusul rubeolei afecteaza atat celulele diploide și tetraploide. Cronic culturi de celule infectate au fost de asemenea obținute din țesuturi infectate cu fetus rubeola si copii cu simptome de rubeolei congenitale (A. Boué, J. Voio, 1969). Culturile pot fi menținute într-o stare de infecție cronică de luni de zile. Cu cultivare pe termen lung a celulelor infectate cronic cu virusul rubeolei LLC-MK2 si celule diploide umane nu a fost observat nici modificări morfologice, dar în ambele cazuri, marcate cu o creștere mai lentă în comparație cu culturile neinfectate. Plotkin și colab. (1965a), în celulele diploide infectate cronic marcat reducerea numărului de generații. Plus față de culturile de anticorpi infectate cronic specifici și adamantadina (substanțe care inhibă virusul rubeolei reproducere) nu a avut nici un efect asupra cursului unei infecții cronice. Evident, virusul este strâns asociat cu celula, si se transmite de la o generație la alta.
De obicei, cultura de celule infectate cu virusul rubeolei și, în special rezistența la exponat infectați cronic cu infecția cu alte virusuri. Spectrul virusurilor, împotriva cărora rezistență apare, foarte larg (Parkman e. A., 1964a).
Mecanismul de rezistență la suprainfecție cu virusuri heterologe, precum și natura infecției cronice sunt încă neclare.
Este cunoscut faptul că virusul rubeolei, înmulțirea la făt, ceea ce duce la formarea unei varietăți de anomalii de dezvoltare. În acest sens, de un interes deosebit este studiul naturii de replicare a virusului în culturi de celule de origine umană. După cum sa menționat deja, în culturi celulare derivate din țesuturi fetale rubeolei afectat detectat de obicei infecție cronică. Infectia cronica poate provoca, de asemenea cu ușurință infecția cu celulele diploide virusul rubeolei derivate din diferite organe ale fatului uman normal. Astfel de celule pot fi menținute în mod continuu în laborator, dar speranța lor de viață este de obicei mai scurtă decât cea a culturilor neinfectate. Este de remarcat, de asemenea că, atunci când virusul rubeolei in actiune vitro pe celule diploide derivate din mai multe organe ale embrionului poate duce la incetarea mitozei (A. Voio, J. Voio, 1969). In „noi“ culturi de celule de reproducere oprit pentru 4-8 pasaje, în timp ce „vechi“ a încetat să se reproducă 1-2 pasaje după infectare. Următoarea Plotkin și Vaheri (1967), a constatat că în celulele diploide WI-38 infectate cu virusul rubeolei, se produce o proteină specifică. Fiind extras din culturile infectate, are un efect inhibitor asupra activității mitotice a celulelor diploide normale și a fost numit de către autori „inhibin“. „Inhibin“ a aratat termolabilității si a pierdut activitatea după tratamentul cu anticorpi antivirali specifici.
Studiul citogenetic a aratat ca in culturi de celule infectate, aberații cromozomiale diploid la sută mai mare decât în ​​neinfectat. Astfel, potrivit (A. Boue, J. Voio 1969) în culturi diploide infectate cronic procentul de celule aberante a fost în medie 20-25, în timp ce în mod normal - aproximativ 10. Studiile efectuate în laboratorul nostru LV Pryanichnikova (1971), folosind o tulpină de celule diploide L-58, și diferite tulpini ale virusului rubeolei, au arătat că numărul de celule aberante a fost de aproximativ 3 ori mai mare decât în ​​culturile infectate cronic decât în ​​cele normale.
Există, totuși, credea că aberațiile cromozomiale nu sunt rezultatul acțiunii directe a virusului in cromozomi, ci mai degrabă depinde de procesul degenerativ totală.
Cinetica reproducerii și morfogeneză. In studiul cineticii multiplicarea virusului rubeolei in culturi de celule transplantate VNK.21 (Vaheri e. A., 1967) au arătat că faza de Eclipse a fost de aproximativ 12 ore. In timpul stadiul incipient al infecției cele mai multe dintre virusul infecțios a fost asociat cu celula. În etapele ulterioare ale raportului de virus extracelular și intracelular sa schimbat în favoarea primului. Titrurile de virus în mediu a atins un vârf de 48-72 de ore.
Când studiul de electroni microscopic al culturilor infectate (MB Queens si altele., 1973- Holmes e. A., 1969), sa constatat că virusul extracelular începe să apară &lsquo-in jurul celulelor individuale după aproximativ douăzeci și patru de ore după infectare. particule virale eliberate din celule exclusiv prin înmugurire, și a dobândit învelișul exterior, care trece prin membrana citoplasmatică.
Formarea rubeolei a fost realizată în diferite moduri: a avut loc pe suprafața celulei în vacuolele complexului Golgi și, uneori, în mod direct în matricea citoplasmatică. Motivele pentru prevalența unei anumite metode de formare sunt neclare. Identificarea de rutină a virionilor este, de obicei, începe cu 2 zile de la infectare. În perioadele ulterioare, numărul de vacuole în celulă este mult crescut. virion Formarea Budding efectuată întotdeauna, în timpul căreia nucleoid membrana înfășurătoare a vacuole sau citoplasmă. Nucleoid au fost strâns asociat cu membrana celulară și vacuole și nu au fost observate în formă de agregate în citoplasmă. Holmes și colab. (1969), în faza târzie a infecției, au fost observate, de asemenea, forme aberante reprezentând particule grosiere care conțin două sau trei dintre nucleoid.
Astfel, formarea virionilor rubeola apare exclusiv în citoplasmă celulelor sensibile, subliniind asemănările virusul rubeolei grup arbovirus A.

Video: Rubeola este un pește. KiselevSA.