Metode bacteriologice și serologice de cercetare în bolile infecțioase

Stabilirea etiologia bolii este mai ușor și diagnostic precis. Laboratorul de cercetare este una dintre multele metode obiective, și să o folosească pentru a fi rațional. Evaluarea incorectă a datelor de cercetare de laborator ar putea duce la erori de diagnostic. Astfel, un rezultat negativ - este nici un motiv pentru a exclude diagnosticul prezumtiv. Un rezultat negativ poate fi din cauza materialului de prelevare a probelor de livrare necorespunzătoare a întârziat la laborator, examenul bacteriologic tehnica imperfectă. Dacă materialul nu este luat în primele zile ale bolii, și numai pe fondul unui tratament cauzal, agentul cauzal nu poate fi recuperată datorită oprimarea viabilității sau decesului acestuia sub influența tratamentului. Prin urmare, proporția scăzută de meningoencefalită meningococice bacteriologic a confirmat, deoarece chiar și o singură injecție de penicilină face, de obicei, în continuare examenul bacteriologic inutil. Rezultatele pozitive ale cercetării bacteriologice poate fi determinant pentru diagnostic, de exemplu, atunci când se alocă hemocultura bacilul tifoidă, paratifoidă A și B, când detectează meningococi, pneumococi, bețișoare de gripă în lichidul cefalorahidian. Cu toate acestea, găsirea de microbi în alte substraturi nu este întotdeauna posibil să se stabilească cu exactitate diagnosticul. Deci, în cazul în care bacilul difteric, meningococcus, pneumococ si bacilul gripei ies în evidență din partea nazală a faringelui, de mucus de la nivelul gâtului și nasului, și Salmonella - din fecale, aceasta ar putea fi o altă boală cu etiologie în aceste bacterii purtători de microbi. Cele mai mari dificultăți pentru interpretarea rezultatelor pozitive în studiul prezintă izolare bacteriologică specii de bacterii oportuniste distribuite pe scară largă în rândul familiilor Micrococsaeae și Enterobacteriaceae. Prin urmare, în diagnosticul bolilor cauzate de agenți patogeni oportuniști, este necesar să se manifeste prudență, și vor ieși afară din 4 criterii: multiplicitatea detectării acestor specii, masivitatea creșterea lor în culturi pe medii solide nutritive, omogenitate alocate subculturi antigenice și fagovarovoy și crește diagnostic titrurile omoloage de anticorpi la serologică studii.
Metodele de cercetare microbiologice sunt împărțite în metode pentru detectarea directă a agentului patogen în corpul pacientului - bacterioscopic și metode bacteriologice de cercetare este o dovadă indirectă a prezenței agentului patogen în corpul pacientului - studii serologice ca scop detectarea antigenilor specifici în materialul infectat sau anticorpi în ser și secreții diferite pacientului.
Examinarea microscopică a sânge, urină, lichid cefalorahidian, mucus de la gât și nas, fecale și diverse substraturi patologice pentru prezența agentului patogen este folosit pentru multe boli infecțioase. Această metodă are o aplicație destul de limitată, deși este foarte important. Este utilizat în special pentru detectarea agenților patogeni din sânge de malarie, febra recidivante, leptospiroza. Lichidul cefalorahidian investigat cu meningita tuberculoasa si mucus purulente de la gât și nas - cu difterie, angina Vincent, cal - cu amoebiaza, balantidiasis, urina lyamblioze- - cu leptospiroza. Bastoane ciuma, antrax poate fi vazut in punctiformă ciuma bubo și frotiuri prelevate din karbunkula- antrax cu frotiu punctiformă din măduva osoasă și splina, granularea ulcere pot fi găsite în leyshmanii- spută - Mycobacterium tuberculosis. Metoda de microscopie avantaj este rapiditatea sa. Rezultatele analizei pot fi obținute în câteva ore. In unele boli (malaria, meningita epidemie cefalorahidian, si altele.) Agenții patogeni pot fi detectate în care pacientul este deja în 1 prima zi a bolii, care este foarte important pentru diagnosticarea în timp util și tratament. extins considerabil oportunitățile preparatelor bacterioscopice de diagnostic datorită prelucrării seruri specifice conținând anticorpi la un anumit patogen marcat cu fluorocrom (metoda imunofluorescentă) sau enzime (imunotestare enzimatică). Anticorpii marcați Astfel se leagă la antigen, detectate prin colorarea imunofluorescentă cu un microscop cu fluorescență și pentru ELISA - produs de colorare a reacției enzimatice după amestecul substrat-indicator administrare.
Metoda de diagnostic bacteriologic se bazează pe izolarea agentului patogen din sânge, lichid cefalorahidian, sputa, mucusul din nas și gât, scaun, urina, pacientul biliar, in timp ce decesele - de bucăți de organe care sunt insamantate in mediul specific. diagnosticare bacteriologice este utilizat pe scară largă pentru a studia mucus de la nivelul gâtului și nasului asupra bacteriilor difterie, pentru a izola agenții patogeni infecții intestinale (cum ar fi holera, dizenterie, salmoneloză, ehsherihiozom) din fecale ale pacientului, patogeni pneumonie - din spută și în alte cazuri. În același timp, să țină cont de particularitățile presupusei infecție, loc localizarea selectivă a agentului patogen, și modul în care evacuarea în mediul înconjurător. Studiul dă rezultate pozitive în primele ore sau zile de boală. Cu toate acestea, laboratorul final de răspuns în majoritatea bolilor infecțioase raportate doar în 2-4 zile, în timp ce bruceloza, tuberculoza - în 3-4 săptămâni. Depinde de timpul necesar pentru creșterea microorganismelor și identificarea lor (biochimice și serologice). Fiecare microb pentru creștere necesită un mediu de creștere corespunzător. În funcție de ce fel de microb sugereaza izola (determinat prin examinare clinică și epidemiologică a pacientului) este selectat corespunzător mediul nutritiv. Uneori, cultura produsă simultan pe mai multe medii de cultură. Valoarea rezultatelor cercetării bacteriologice este determinată în mare măsură în mod corect dacă materialul este luat de la pacient și dacă acesta este livrat la dreapta laborator. materialul infecțios este colectat într-un recipient steril aseptic.
Tabel. 1 prezintă datele de bază privind calendarul de a lua materiale pentru cercetare și medii pentru inoculare.
Material pentru studiu, cât mai curând posibil, pentru a fi livrate la laborator. Dacă acest lucru nu este posibil, trebuie să fie depozitate într-un frigider la 4 ° C, sau adăugarea unui conservant. În unele cazuri, însămânțarea trebuie să fie efectuată ex tempore (tuse convulsivă, infecția meningococică, gonoreea). După izolarea și identificarea agenților patogeni, determină, de obicei, sensibilitatea lor la antibiotice și alte medicamente chimioterapice. Este în mare măsură ajută la corectarea terapiei și de a alege mijloace etiotropic eficiente.
În cazul infecțiilor cauzate de bacterii oportuniste, separarea lor de substraturi, în mod normal nesteril (scaun, urina, sputa, etc.), nu este considerată ca o dovadă absolută a rolului etiologic în geneza acestor microorganisme bolii. Contaminarea microflorei endogene la pacienți este semnificativ mai mare decât cea a transportatorilor de bacterii. Prin urmare, numai calculul cantitativ insamantat microorganisme infectează animalele suspecte de material (bioanaliză la șoareci cu infecție pneumococică).

Tabelul 1 Timing luând materiale în infecții bacteriene

Studii serologice. reacția imună este utilizat pe scară largă pentru diagnosticul bolilor infectioase la om. distinge reacție în care în anticorpii cunoscuți defini antigene necunoscute și răspuns în scopul găsirii de anticorpi necunoscute de antigeni cunoscuți. Metodele promițători bazate pe detectarea bolii în perioada timpurie a antigenelor microbiene într-o varietate de substraturi. Această sarcină poate rezolva doar parțial testul de fixare a complementului (DGC). O metodă mai sensibilă a fost reacția indirectă (pasivă) hemaglutinării (RIGA) cu diagnosticum anticorp eritrocit, care este utilizat pentru diagnosticul de dizenterie și a altor infecții. În această reacție, situată pe o tanizirovannyh eritrocit suprafață de imunoglobulină specifică leagă antigenul omolog. oameni și animale (Eritrocite native și formalizate a) pretratate cu tanin dobândi crescut capacitatea de a adsorbi substanță proteiformă. Deoarece adsorbanții utilizate cu excepția eritrocitelor latex, colodiu, bentonită și altele. Reacție Latex aglutinare este utilizat pentru detectarea antigenilor balansierelor pneumococ influenza, meningococi. Prin reacția pozitivă a particulelor de latex pentru a precipita. Importanța practică a unei astfel metode extrem de sensibilă și specifică pentru determinarea antigenelor bacteriene, ca imunoelectroforeza contor (VIEF). In ultimii ani, pentru diagnosticul unei varietăți de infecții a fost aplicat de reacție koagglyutinatsii. Această reacție dintre antigen și anticorpul fixat pe suprafața de S. aureus conținând proteina A (componenta peretelui celular al celor mai multe tulpini de Staphylococcus aureus). Acesta din urmă are capacitatea de a se conecta la Fc-fragment de Ig G. Rezultatul este imunoabsorbant anticorp de tip diagnosticum, care reacționează cu antigenul omolog în detrimentul libere de imunoglobuline Fab fragmente. Vizual, acest lucru este exprimat fenomenul de aglutinare a Staphylococcus. Aplicarea reacției koagglyutinatsii promițătoare pentru detectarea rapidă a antigene bacteriene în sânge, lichid cerebrospinal, spută și alte materiale.
În practică de laborator se aplică, de asemenea, metoda imunofluorescentă Coons, atunci când se utilizează o molecula de colorant fluorescent atasat la un anticorp, reacție antigen-anticorp devine vizibil într-un microscop fluorescent. Spre deosebire de alte teste serologice atunci când conexiunea antigenului cu anticorpul este judecat de efectul secundar cauzat de aceasta (aglutinare, precipitare etc.), tehnica imunofluorescentă vă permite să observe reacția având loc și, prin urmare, judeca prezența și localizarea antigenului.
În prezent, o distribuție mare devine metoda imunoenzimatică, are o sensibilitate ridicată și versatilitate. Această metodă se bazează pe determinarea antigenului prin imuno
sorbent asociată cu enzima. O astfel de reacție dintre antigen și anticorpul a avut denumirea ELISA (enzymelinked immunosorbent assay). De exemplu, în cazul în care este necesar pentru detectarea antigenului în celulă cu anticorpii omoloage corespunzătoare pot fi legate covalent cu un anticorp enzimă și acest anticorp este apoi marcat cu o enzimă pentru a reacționa cu antigen.
Cel mai sensibil și permite detectarea conținutului scăzut de antigen (0,5 ng / ml) - metoda radioimunoanaliza, cu toate acestea necesită echipament special.
Aceste metode au mai multe avantaje față de bacteriologică. Aceste metode de diagnostic rapide care permit determinarea antigenelor de patogeni în câteva minute sau ore. In ciuda distrugerii bacteriilor după tratament cauzal în curs de desfășurare, antigenele de patogeni pot persista în organism timp de 3 până la 4 săptămâni și detectate prin aceste metode. Cu toate acestea, trebuie să se țină seama de faptul că există o relație antigenic largă între genuri și specii în cadrul fiecărei familii de bacterii și chiar între familii diferite. Acest lucru poate duce la rezultate fals-pozitive. Determinarea antigenelor bacteriene nu stabilește sensibilitatea la antibiotice, care reduce, de asemenea, valoarea acestor metode.
Testele serologice în scopul găsirii anticorpilor serici specifici la pacienți cu infecții bacteriene, sunt utilizate pentru producerea unui diagnostic retrospectiv, deoarece ele devin pozitive până la sfârșitul 1-2 săptămâni de boală. În viitor, titrul lor crește de obicei, ceea ce este diagnostician indicator foarte important. Prin urmare, testele serologice trebuie repetată la intervale de 5-10 zile. Reacțiile sunt considerate pozitive în cazul în care titrul lor este crescută prin repetarea studiului este de 4 ori sau mai mult. Cu toate acestea, boala prelungita (bruceloza, tularemia, pneumonie cronică) dinamica serologică mai puțin distincte, astfel că trebuie să se bazeze pe înălțimea titrul de anticorpi. Valoarea de diagnosticare sunt doar anumite niveluri de anticorpi. De exemplu, o valoare de titru 1 pentru diagnosticul infecțiilor intestinale în RIGA: 320-1: 640 și mai mare (salmoneloză, dizenterie). Este necesar să se ia în considerare situația epidemiologică din zonă și să ia în considerare nivelul „normal“ de anticorpi din populația sănătoasă. In Phragmites, care este folosit pentru a căuta anticorpi cu adsorbție pe eritrocite nu aplicate imunoglobuline, iar substanța antigenică polizaharid sau proteină. Aceste instrumente de diagnosticare sunt numite hematiilor antigenic. Pe lângă reacțiile de aglutinare în diagnosticul infecțiilor bacteriene folosind DGC reacție hemoliza indirectă, reacția imunofluorescență indirectă, imunoenzimatică indirectă, reacția de neutralizare și alte metode serologice.
Testele serologice au doar o fiabilitate relativă, deoarece pot exista nespecifice sau pozitive la pacienții care au suferit infecția corespunzătoare în trecut (răspuns anamnestic), precum și în primirea de vaccinare (reacția vaccinării) preventivă. Pentru o evaluare mai obiectivă a rezultatelor testelor serologice utilizate studiul diferențiat al anticorpilor de natură diferită fizico-chimice. Un anticorp din aceeași specificitate imunologică poate să aparțină diferitelor clase de imunoglobuline și, astfel calitativ diferite activități funcționale. Acesta anticorpi de tip fizico-chimică determină natura și intensitatea ei provoacă reacții imunologice, cum ar fi liza, aglutinare, neutralizarea proprietăți toxice și antigenice, care antigenul este semnificația biologică a reacției - anticorp. În prezent disting cinci clase principale de imunoglobuline umane: Ig G, Ig M, Ig A, Ig D și Ig E. In reacțiile rolul principal al imunității umorale aparține primelor trei clase. In bolile infecțioase acute în stadiile incipiente ale răspunsului imun ser determinat primul makroglobulinovye începe cu Ig M 19S sedimentare constantă, apoi la o dată ulterioară apare gamma anticorp globulină clasa G cu sedimentare 7S constante. Ulterior 78 anticorp dominat și 198-sinteza anticorpilor este de scurtă durată. Tratamentul seruri de sânge de agenți (2-mercaptoetanol, cisteină, etc.) Rezultate reducerea în inactivarea selectivă Ig M, nici un efect asupra titrului Ig G. Anticorpi determinat în seruri după procesarea acestuia agentul reducător corespunde numărului 78 de anticorpi. Determinarea anticorpilor de diferite natură fizică și chimică ajută la stabilirea stadiului bolii, boala infecțioasă a distinge de reacții anamnestici, în care sunt determinate în principal de 198 de anticorpi bacillicarriers identificat tifoide cronică atunci când sinteza este perturbat de 198 de anticorpi și anticorpi dominat 78.
Reacții încrucișate asociate cu prezența unor antigene comune între diferite bacterii, desigur, împiedică interpretarea corectă a studiilor serologică. Cu toate acestea, prin studierea dinamicii anticorpilor circulanți și determinarea diferitelor clase de imunoglobuline posibile pentru a stabili adevărata natură a bolii. Studiile serologice ajuta la clarificarea diagnosticului clinic, și în infecțiile cauzate de bacterii oportuniste, confirmă rolul lor în etiologia bolii cu rezultatele bacteriologice pozitive, în special în cazurile în care cercetarea se desfășoară pe un fundal al terapiei antimicrobiene. Metodele serologice în laborator sunt de o importanță secundară și nu se pot substitui examenul bacteriologic. Complexul de cercetare microbiologic permite specificarea diagnosticului clinic syndromological și de a stabili cauza acestor boli care au natură polietiologichesky. Necesitatea unei astfel de cercetare, datorită rolului lor important în diagnosticul diferențial al bolilor infecțioase și alegerea deliberată a unui tratament cauzal.