Metode virologice de cercetare in boli infectioase

Studii virologice in clinica de boli infectioase devine din ce în ce mai importantă, care este în primul rând datorită ponderii crescută a infecțiilor virale, clinica, care nu este întotdeauna tipic. În același timp, metodele rapide și fiabile de diagnostic virologic nu sunt concepute pentru toate bolile infecțioase, multe dintre ele de muncă intensivă, pentru a efectua ei au nevoie de condiții speciale, animale de laborator, medii de cultură și de personal instruit. În prezent, diagnosticul infecțiilor virale folosind 3 tipuri principale de cercetare.
1. Examinarea microscopică a materialului infecțios pentru detectarea antigenului viral sau modificări patognomonice în țesuturi. Pentru scopuri de diagnostic, examenul microscopic direct al pacienților cu un material infecțios este utilizat într-un număr limitat de infecții virale (rabie, varicela, febra galbena, herpes, etc.). aplicare mai largă a metodei se bazează pe detectarea antigenului viral folosind anticorpi fluorescenți. Metoda de imunofluorescență poate fi valabilă doar cu o împlinire clară a tuturor cerințelor tehnice.
2. Metode virusologice.
3. Studii serologice pentru a determina creșterea titrului de anticorpi în dinamica bolii. Metodele serologice de cercetare sunt disponibile mai ușor în laborator.
Pentru aceste studii, este necesar ser luare de sange in timpul bolii acute si convalescenta (ser proaspăt). Probele de sânge pentru testele serologice sunt luate fără anticoagulante și conservanți sterile.
Principalele etape ale studiilor virologice sunt selectarea virușilor și identificarea lor, caracterizarea proprietăților biologice de bază. Pentru izolarea diferitelor grupuri de virusuri în prezent, nu există nici o tehnică unică. Acest lucru se datorează în primul rând la varietatea de proprietăți și caracteristici ale culturii în afara gazdei lor. Pentru a investiga biosubstrates utilizare (spălare din membranele mucoase, sânge și componentele sale, fluid cerebrospinal, urină, fecale, specimene biopsie de organe și țesuturi, sau felii, luate la autopsie), care este supusă unui tratament special, urmată de trecerea materialului. Luate pentru materialul de cercetare trebuie păstrat la o temperatură de la -20 ° C până la -70 ° C În funcție de prelucrarea diagnostic preliminar al materialului are propriile caracteristici, dar în toate cazurile, se presupune a primi substrat purificat maximal de celulele impurități de mucus de organe și țesuturi sau fragmente ale acestora bacterii. Acest lucru se realizează prin omogenizarea materialului într-un aparat special sau triturare într-un mojar cu sticla de cuarț rece (fragmente de organe și țesuturi) cu adaos de steril răcită (4 C) 0,9 %

Video: Cele mai grave viruși și boli din istoria omenirii.

soluție de clorură de sodiu pentru a se obține o suspensie de 10-30%, urmată de centrifugare la 1500-3000 rot / min timp de 10-15 min. Supernatantul astfel obținut a fost utilizat pentru studii ulterioare.
Înainte de dezvoltarea intensivă și introducerea în metode de cultură practică larg țesuturi și celule infectate animale experimentale sau de embrioni de pui aplicat. Aceste metode sunt utilizate în acest moment. Detectarea virușilor care utilizează animale cele mai adecvate în cazurile în care este posibil să se reproducă experimental modelul tipic al unei boli infecțioase sau a unora dintre manifestările sale. Deci, inițiatorilor și arbovirusi Coxsackie de grup pot fi detectate dupa infectare in creier soareci sugari, gripa - atunci cand embrioni de pui infectate, sau administrare nazală la șoareci din materialul de testat. În laboratoarele de virusologie din ultimii ani a devenit metoda cea mai larg aplicată de culturi de celule și țesut, care să permită să aloce adenovirusuri, virusuri herpes, virusul sincițial respirator, miksovirusy și altele deja în primele etape ale cercetării pentru a efectua diagnosticul etiologic al bolii. Motivul pentru acest lucru sunt caracteristici bine studiate citologică interacțiunea majorității virusurilor și a celulelor. Astfel, infectarea celulelor HeLa, Hep-2 materiale care conțin adenovirus de tip 2, deja în ziua 3 duce la o schimbare în caracterul de creștere a monostraturilor de celule și apariția în formă de struguri fasciculelele celule tipice și T. G., bine definit în obicei microscop cu lumină la o mărire redusă.
importanță excepțională pentru diagnosticul etiologic al bolilor infecțioase are izolarea de standardizare a virusului din materialul de testat, că în această etapă a lucrării implică utilizarea animalelor liniare pure genetic pe baza fenotipice lor (în principal vârsta) caracteristici. Acest lucru se datorează în primul rând faptului că animalele experimentale ale diferitelor linii genetice și de vârstă în diferite grade sensibile la viruși. Deci, atunci când infecția intracerebrală șoarecilor cu un virus tulpina neurotrop WSN gripei la animale BALB linie / c, A, CBA și sensibilitatea corcitură este cea mai mare, același model stabilit în cazurile de administrare nazala a materialului de testat. Esențial pentru rezultatele finale de izolare a virusului este o examinare preliminară a animalelor, ouă embrionate, culturi de celule și țesuturi pentru infecția cu virus latent. Un foarte larg utilizat in embrioni de pui de practica de laborator pot fi infectate cu virusurile leucoză aviare, encefalomielita aviară, sinuzita infecțioasă, psitacoza, patogenii boala Newcastle unor infecții bacteriene (germen și colab.), Și micoplasmelor. Chiar și mai particular agenți bacteriene și virale capabile sa infecteze spontan celule de cultură și țesuturi și de a supraviețui în ea. Prezența lor afectează în mod semnificativ evaluarea materialului. Unele specii de micoplasme în culturi de celule
poate fi responsabil pentru hemaglutinare și gemadsorbtsiyu și chiar formă plachete sub strat de agar, format de un virus similare. La fel de important este contaminarea culturilor de celule de același tip de alții, este cel mai adesea asociat cu celule HeLa și observate atunci când se lucrează cu diferite tipuri de culturi în aceeași cameră, cu manipularea slaba a obiectelor de sticlă de laborator și altele. Prezența contaminării culturilor celulare sau animale infectate agenți bacterieni, cum ar fi în general, apare destul de clar (natura schimbătoare a creșterii celulelor monostrat, proprietățile de cultură ale mediului, moartea embrionilor de pui sau de animale, cu simptome specifice și t. d.) și dificil speciale udneny nu este în evaluarea rezultatelor. Mai complex este întrebarea cu infecție latentă, care necesită utilizarea și serologică alte metode. Aceste orientări ar trebui să fie luate în considerare în activitatea medicului-virusolog, în special pentru diagnosticul etiologic al cazurilor obscure.