Prepararea produselor decorticate - baza histologiei

Video: Microbiologie. Preparate temporare de preparare (E. Zvonaryova)

Video: Bioefekts: Preparate microbiologice pentru s / s

În aceste cazuri, când este necesar să se examineze structurii microscopice a obiectului având o structură filmy (seroasă și meningele, membranele conjunctive și t. D.), integrale (total) Preparate Preparată. Pentru acest film testat este excizată porțiune și de a evita ridarea înaintea intepatura de fixare în stare extinsă, pe o bază de ceară (sau plută) (vezi. P. 153).
La finalizarea materialului de fixare este tratat într-un mod convențional: opritorului spălate, vopsite, deshidratate și încorporate în ilumineze mediu respectiv.

In vivo (vitale) țesături de colorat

Descris în secțiunile anterioare de prelucrare a materialului metode pentru examinarea microscopică a organelor și țesuturilor au un dezavantaj major: cercetătorul este întotdeauna o stare statică a obiectului, înregistrată în momentul sau după încetarea proceselor vitale. Firește biologi doresc să fie înarmat cu tehnici care vă permit să monitorizeze organele vii și țesuturi. Această posibilitate se deschide cu o introducere la practica a metodelor de colorare vitală a obiectului testat.
Cerințele de bază pentru vopsele supravital: toxicitate minimă și colorarea selectivă a elementelor structurale individuale ale celulelor și țesuturilor.
Cunoscând distribuția țesutului special a diferitelor coloranți în funcționarea normală a organismului, puteți defini diferite deformare are loc la
aceste sau alte stări patologice. îngrijire considerabile sunt furnizate coloranți vitali în studiile embriologice, studiul de dezvoltare, deoarece este posibil să se efectueze cu succes monitorizarea mișcării celulelor colorate. Cele de mai sus se aplică pe deplin la studiul culturii de țesut (cultivarea pe bucăți medii nutritive organe și țesuturi speciale).
Ca și coloranți histologice convenționale, toți coloranții pentru colorația vitale sunt împărțite în bază, acide și neutre.
coloranți de bază sunt percepute de aproape toate celulele, dar este în particular celule bune și structurile bogate în lipide. Este această ultimă proprietate oferă colorare vitală bune cu coloranți de bază ale țesutului nervos.
coloranți acizi dye numai anumite tipuri de celule și în primul rând celulele sistemului reticuloendotelial, având o activitate fagocitară ridicată. Aceste celule au un rol important în reacția de protecție a organismului. Capacitatea lor de a acumula particule coloranți acizi in vivo utilizează pe scară largă de colorare vitală pentru a examina starea lor funcțională. Astfel de coloranți includ tripan albastru, cerneala, litiu carmin.
Există diferite metode de utilizare coloranți vitali. Aproape de animale de laborator colorat soluții sunt administrate intravenos, intraperitoneal sau injectare subcutanată, în care viteza de colorare depinde de modul de administrare (maximum - la o doză intravenoasă, cea mai mică - subcutanat). colorant Frog este administrat în punga limfatic spinării sau vena abdominale. Culoare animale mici acvatice produc înfrumusețarea de apă în acvariu.
Folosit ca metodă de introducere a unui colorant prin gura, amestecare în hrana lui.
De obicei, coloranții sunt dizolvate în apă distilată sau soluție izotonică de clorură de sodiu. Cu toate acestea, solventul cel mai ideal este serul sanguin al animalului corespunzător, asigură o mai bună absorbție a colorantului. Pentru a obține o astfel de soluție este preparată în condiții sterile soluție 1% ser colorant corespunzător, a fost centrifugat (3000-3500 rot / min) și supernatantul a fost aspirat cu o pipetă.
Stăpânirea tehnica de colorare vitală este cel mai convenabil în procesul de vopsire a țesutului conjunctiv alb de șobolani (sau șoareci) tripan albastru.
Prepararea soluției. Se dizolvă 1 g albastru de tripan în 100 ml soluție izotonică de sodiu (sau apă distilată) clorură. Caracterul adecvat al soluției atunci când este depozitat într-un loc rece timp de 3-4 săptămâni. Înainte de utilizare, soluția de colorare a fost filtrată, sterilizată (prin fierbere timp de 10-15 min) și se lasă să se răcească la 25-35 ° C Simultan sterilizat dvuhgrammovy seringă și un ac.
injecție subcutanată. Asistent surprinde forcepsul piele de șobolan experimentală în partea din spate și de altă parte, ia animalul la vârful cozii și se întinde înapoi la partea de sus de masă. Experimentatorul formând o soluție colorantă seringă (rata de 0,5 ml per 20 g greutate corporală) mână liberă trage pielea de pe spate (sau pe suprafața laterală a corpului animal) și prin lipirea acul în piele, intră vopseaua. 
Introducere intraperitoneal. Asistentul ia șobolan, cât și în experimentul anterior, dar trage-l pe verticală cu susul în jos. În această situație, există un corp în mișcare a cavității abdominale la diafragma, ceea ce îl face ușor să pătrundă în cavitatea abdominală fără a deteriora maruntaiele. Acul este introdus în jumătatea inferioară din stânga a peretelui abdominal la un unghi ascuțit (în jos). Metoda mai rapid și mai ușor decât legarea labelor în poziția culcat pe spate. Concentrația și cantitatea de colorant este aceeași ca și atunci când se administrează subcutanat.
Administrarea intravenoasă. Ea poate fi făcută în vena jugulară sau coadă, într-un șobolan pre-legat burta mașină specială în sus. Cantitatea de colorant este mai mică de două ori decât în ​​cele două metode anterioare, concentrația este aceeași. Atunci când se produce cu succes injecție intravenoasă unică colorare bună în decurs de 24 de ore, în timp ce în interiorul peritoneală. - Administrarea subcutanată de 48 de ore este de obicei repetat de mai multe ori după 3-4 zile. Colorarea generală Ofensiva identificată cu ușurință de albastru în față și membranele mucoase ale irisului ochilor. piele totala albăstruie vine mai târziu.
Animalele au fost sacrificate una dintre metodele acceptate (decapitare, eter sau cloroform), deschiderea și ia produc să fie examinate organe și țesuturi.
Fixation. Fixation depozitată în țesuturile cele mai bune tripan albastru apare atunci când se aplică opritoarele complexe -. Buena Shtiva etc. Cu toate acestea, dacă acesta este absent, poate fi utilizat și formol (165.). Trebuie avut în vedere faptul că peletele de licitație decolorate, iar vopseaua difuzeaza in alte structuri. preparate experimentale pot fi realizate din felii obținute pe un microtom de înghețare. De obicei, materialul este turnat în parafină, secțiuni de 5-7 mm au fost preparate și colorate grosime :. Când utilizați tripan albastru (sau carcasă) - carmin sau roșu neutru, atunci când se utilizează o carmin litiu - albastru de metilen, etc. Apoi deshidratează, ilumina și încorporate în balsamul.