Histochimia sistemului nervos - baza de histologie

În ultimii ani, utilizate pe scară largă metode histologice de laborator neyrogistohimicheskie, care, spre deosebire de metodele clasice de neurohistologice oferă o oportunitate de a identifica elementele funcționale caracteristice diferitelor părți ale sistemului nervos. Cele mai frecvente și disponibile de la ei - aceasta metode de determinare a componentelor colinergici și adrenergici.

Metodă de detectare a componentelor sistemului nervos adrenergic

 (Metoda Falk - Hillarp fără liofilizarea) *
Metoda se bazează pe capacitatea catecolilor fluorescențe după prelucrare perechi de paraformaldehidă în raze ultraviolete transmise. Ca urmare, structura care conține catecolamine, strălucire galben-verde. Trebuie remarcat faptul că această metodă nu este specifică numai sistemul nervos, ci și la alte țesuturi ale corpului care conțin catecolamine (medulosuprarenalei etc.).

* Această metodă este adecvată pentru detectarea fibrelor nervoase adrenergice in toate organele, cu excepția creierului și pecheni- pentru a lucra cu aceste țesuturi trebuie să utilizeze după congelare și uscarea prin congelare bucățile parafină impregnare în vid.

Prepararea paraformaldehidă umiditate anumite. În funcție de umiditatea dorită în partea de jos a paraformaldehidei desicator turnat acid sulfuric o anumită concentrație. Paraformaldehidă, care este în ceașcă, păstrată într-un desicator să stea timp de 7-10 zile.
Schema obține paraformaldehidă umiditate anumite

Pentru cele mai multe autorități recomandă paraformaldehidă 60% umiditate.
Metoda. 1. Bucati de examinat organului congelat pe gheață uscată.

2. Secțiunile criostat au fost preparate 15-30 microni grosime (în funcție de organul), care este transferat pe un pahar și se usucă într-un curent de aer cald timp de 5-7 min.

3. Instalați suportul de sticlă și plasat într-un vas de sticlă cu un volum de 1 L, turnat în fundul căreia 5-6 g de paraformaldehidă având o umiditate corespunzătoare, după care vasul a fost sigilat și plasat într-un termostat la + 80 ° C timp de 60 min. Feliile au fost îndepărtate și înglobate în parafină lichidă (ulei de parafină) și examinat sub microscop cu fluorescență folosind BES-filtre 14-4, FS-14, FS-1-2 și blocare ZS-18 filtru de lumină (înainte și după ferestrele de vizualizare trebuie să fie stocate în întuneric pentru a evita extincția fluorescenței).
Pentru controlul reacției pentru porțiunea de specificitate ochelari felie este încălzit într-un cuptor într-un cilindru de sticlă, fără paraformaldehidă în aceleași condiții.

Metoda de detecție a componentelor sistemului nervos colinergic (metoda Karnofsky)

Spre deosebire de metoda anterioară bazată pe detectarea directă a catecolaminelor țesutului, această metodă se bazează pe detectarea activității acetilcolinesterazei enzima care catalizeaza procesul de scindare a neurotransmițătorului acetilcolină la punctul de localizare (neuron și fanere sale). Structuri de identificare apare ca rezultat al depunerii de produs de reacție colorat a substratului enzimatic.
Prepararea mediului de incubare
Pentru prepararea soluțiilor în urma mediu de incubare utilizat.

1. a) NaOH 0,2 M: 0,8 g NaOH + 100 ml de H2O b) sare 0,2 M NaH-maleic (soluție):

2,32 g de acid maleic + 60,0 ml H2O + 0,8 g de NaOH și se aduce la 100 ml.
Dintre cele două soluții preparate primă soluție de lucru: 26,9 ml 0,2M 0,2M 50,0ml OH + sare NaH-maleic + H2O până la 200 ml.

1. citrat de sodiu 0,1 M: 2,59 g Na3C6H5O7 + 100 ml H2O.
2. C11SO4. 6N2 O: 0,375 g C11SO4 + 50,0 ml H2O.
3. sare roșii din sânge: 0,083 g de K3Fe (CN) 6 + 50,0 ml de H2O.

Mediul de incubare se prepară înainte de utilizare, se amestecă în ordinea următoare și agitate bine.
Atsetiltioholinyodida 10 mg
Acid maleinovokislogo Na 0,2 M (pH 6,05) 13 ml
0,1 M citrat de sodiu 1 ml
30 M CuSO4 2 ml
2 ml de apă distilată
K3Fe 2ml (CN) 6 May M
In grupul de control în loc atsetiltioholinyodida butiriltioholinyodid aplică aceeași concentrație.
Metoda. 1. Bucati ale corpului de testare (dimensiune 3x3 mm) au fost fixate timp de 2,5-3,5 ore la temperatura de + 2 + 4 ° C în soluție de formalină 4%, tamponat la pH 7,6 cu ajutorul tampon fosfat 0,075 M conținând 0,044 M zaharoză.

1. Umed și plasat în 0,044 M zaharoză la + 2 + 4 ° C timp de 15-16 ore, după care nou umed și congelat rapid cu gheata uscata.
2. secțiuni tăiate într-un criostat (1-30mkm groase), transferate pe sticlă în aer uscat și plasat într-un mediu de incubare timp de 60 de minute (la temperatura de + 37 ° C).
3. Se transferă sticla cu o ceașcă felie cu soluție preparată formol 10% clorură de sodiu izotonică timp de 10 minute.
4. Se clătește în două porțiuni de apă distilată, și au concluzionat carmin tentă ca de obicei în Canada balsamul.

rezultat. Componente colinergici, neurocitelor citoplasmă și fibrele nervoase sunt colorate în culoarea maro, a cărei intensitate este direct proporțională cu activitatea enzimei.

Video: Lecții de Biologie №45. Structura și funcția creierului.