Identificarea proteinelor (total) - baza histologiei

Video: Prezentarea pe tema "PROTEINE STRUCTURA"

Video: Video. Determinarea Express de carne de puritate

Proteine ​​- polimerii naturali ai aminoacizilor care alcătuiesc marea majoritate a structurilor de celule si tesuturi. Este conectat cu material plastic, energie, transport și procese enzimatice. De aceea histochimic detectarea lor este esențială pentru a caracteriza schimbările care apar în celulele și țesuturile (atât normale, cât și în patologia).
Dintre metodele existente metoda cea mai utilizată pentru detectarea proteinelor totale prin Danielli, care au modificat cu succes histochemists sovietice Shubich MG (1963).

Identificarea proteinelor (total) prin metoda Danielli (modificarea Shubina MG)

(Carnoy oarba Brodsky, 10% formalină neutră)
Esența metodei constă în aceea că preparatele histologice este mai întâi supus acțiunii de rozanilina tris-diazoniu (fucsina de bază) care reacționează cu multe resturi de aminoacizi ale proteinelor tisulare. Pentru a spori colorarea H acid tratat care se conectează cu grupări reactive trisdiazoniya deja legat de proteinele. Intensitatea culorii este determinată de concentrația proteinei în diferite structuri histologice.
soluţii de lucru
Dvunormalny (2N) acid clorhidric. La 20 ml de acid clorhidric concentrat (densitate 1,19), se adaugă 80 ml apă distilată.
O soluție de fucsină de bază. Se dizolvă 4 g de fucsină de bază (de brand „pentru fucsin de acid“) în 100 ml de soluție de acid clorhidric 2N (timp pot fi stocate soluție).
O soluție apoasă de nitrit de sodiu.
Se dizolvă 4 g de nitrit de sodiu (NaO2) în 100 ml de apă distilată (soluția poate fi la frigider).
Trisdiazoniya soluție bazică. Tubul a fost turnat 2 ml de soluție de fucsină bazic și apoi prin picurare s-a adăugat cu agitare constantă eprubetă 2 ml de soluție de nitrit de sodiu. Blend pentru 3-60 devine de culoare galben-pai.
Soluție de lucru tris-diazoniu. S-a adăugat 0,5 ml dintr-o soluție de tris-diazoniu 100 ml apă distilată, tamponată în prealabil cu adăugarea a 20 ml atsetatveronalovogo sau alt pH tampon 7,9 (soluție de lucru tris-diazoniu persistă timp de câteva ore).
O soluție saturată de H acid. Se dizolvă 1 g de H acid în 50 ml atsetatveronalovogo sau alt tampon cu pH 9,2.

Video: Curs 1.1 | Concepte de bază în chimie | Hope Tantsura | Lectorium

metoda de colorare (secțiuni de parafină)

1. Adu-secțiuni la apă.
2. Pune în soluția de lucru de tris-diazoniu 10-20 minute (mai mult timp de incubare exactă este ales empiric).
3. Se clătește în apă distilată.
4. Se spală în trei modificări atsetatveronalovogo sau tampon alt pH 9,2 la 2 minute fiecare.
5. Se transferă într-o soluție saturată de H-acid timp de 15 min.
6. Se spală bine cu apă distilată.
7. Neutraliza, să lumineze și să încheie în balsam. Rezultat. structuri histologice colorate în culoare roșie-violet de intensitate diferite.

Video: # 08. Formula de calcul al metabolismului și al energiei aportul bazale. O alternativă simplă la calcule complicate.