Detectarea și identificarea mucopolizaharide acide - baza histologiei

Detectarea și identificarea mucopolizaharide acide (glicozaminoglicani)

Date privind prezența Convingător de mucopolizaharide acide pot fi obținute prin aplicarea completă a următoarelor metode.
Identificarea mucopolizaharide acide pe o Gal metoda (Hale) (extemporaneu, cleme - formalina Karnua- turnarea parafină lichidă). Soluție de fier coloidal. În 100 ml de apă fiartă distilată se toarnă cu agitare 12,8 ml de soluție 10% de clorură ferică, modificările soluție de culoare de la maro la roșu închis. Pentru a scoate din dializa HK1 produce.
O soluție de acid acetic - 2M.
Soluția acidulată geksatsiano-ferat (2) de potasiu - ferocianura și HK1.
Metoda. 1. Secțiunile 5-7 microni deparafinate gros și adus la apă.

1. Se scurge volume egale dializate clorură ferică și soluție de acid acetic 2M. Pune felii în această soluție timp de 10-15 min.
2. Clatiti bine în câteva porțiuni de apă distilată.
3. Se prelucrează soluția proaspăt ferocianura în 10 min.
4. Se clătește în apă distilată.
5. Dokrasit nucleu un colorant nuclear (alaun carmin, hematoxilină și colab.).
6. Deshidrata, să lumineze, să încheie în balsam.

Rezultat. mucopolizaharide acide vopsite albastru, nucleul - în roșu.
Detectarea mucopolizaharide acide albastre alcian pe Stidmenu (ecluze - Carnoy, Buena, formalin- turnare parafină). Metoda se bazează pe formarea de legături chimice între grupele acide ale mucopolizaharide acide (glicozaminoglicani) cu albastru Alcian. Folosit pentru a identifica mucine epiteliului și țesutului conjunctiv.
Prepararea soluției albastru Alcian. 0,1g de colorant dizolvat în 100 ml de acid acetic 3% și se filtrează.
Metoda. 1. Secțiunile 5-7 microni deparafinate gros și adus la apă.

1. pată albastru Alcian în soluție svezheotfiltrovannom timp de 10-30 secunde.
2. Se clătește în apă distilată.
3. Ehrlich pata gemalaunom timp de 5-10 minute.
4. Diferentiati în soluție 1% alcool.
5. Clătiți sub jet de apă timp de 10-20 minute.
6. Deshidrata, să lumineze, să încheie în balsam.

Rezultat. mucopolizaharide acide albastru-verde miez - rosu albastru inchis sau închis.
Metodele bazate pe metacromă. Metachromasia - este o colorație țesut ca urmare a reacțiilor chimice tesatura - dye structuri colorate de culoare diferă semnificativ de culoarea colorantului originală.
Practic metachromasy conform înțelege fenomenul observat atunci când se utilizează grupul tiazină de coloranți.
metachromasia Identificarea folosind albastru toluidină (secțiuni înghețate sau fixate cu formalină, secțiuni de parafină). 1. 5-7 microni secțiuni groase au fost aduse în apă.

1. Pune timp de 4-6 ore în soluție apoasă 0,5% de albastru de toluidină.
2. Se clătește în apă distilată.
3. În scopul histochimice explora în apă imediat.

Rezultat. substanță metacromatice roșu, roz (y-metachromasia) sau purpurie (p-metachromasia).
Ea se bazează pe metodele metacromă de obținere a preparatelor permanente.

Diferențierea mucopolizaharide acide

mucopolizaharide acide, ca regulă, nu dau reacție pozitivă Schick, dar colorate cu fier albastru și coloidal Alcian da colorație metacromă.
mucopolizaharide acide sunt separate în nesulfatată (condroitină și acid hialuronic) sulfatate și (sulfat de condroitină A, B, C, keratosulfat, heparină, heparină).
Tratamentul cu hialuronidază. Unii deparafinate și adus la secțiunile de apă (control) au fost incubate la 37 ° C într-o hialuronidază soluție testiculare preparată în soluție izotonică de clorură de sodiu (1 mg enzimă per 1 ml) timp de 3 ore, ceilalți - în soluție pură de clorură de sodiu izotonică (la în aceleași condiții). Apoi, toate secțiunile au fost colorate prin una dintre metodele de pe mucopolizaharide acide. Lipsa culorii în secțiunile de control și de prezența altor dovezi ca tesutul este acidul hialuronic și condroitin sulfat C și A.
Dacă hialuronidaza în loc testicular aplica bacterian (enzimă acționează mai moale), este posibil să se diferențieze acidul hialuronic.
reacția de metilare. secțiunile de control Deperafinirovannye au fost plasate în soluție de acid clorhidric 0,1N apă în metanol absolut și se incubează la 58 ° C timp de 2-3 ore. Apoi, împreună cu felii colorate sau toluidina albastre sau Alcian. Lipsa culorii în secțiunile de control și de prezența altora arată că, în țesuturile studiate sunt mucopolizaharide sulfatate (metilare a dus la desulfation lor).