Colorarea țesutului prin metoda lui Van Gieson, Mallory - baza histologiei

Colorarea țesutului conjunctiv și muscular prin metoda lui Van Gieson

Această metodă are mai multe avantaje comparativ cu pata hematoxilină-eozină, ca diferite culori componente de țesut diferite. Când se colorează prin Van metoda Gieson sunt utilizate două soluții: un hematoxilină fier Weigert (preparare vezi mai jos.) Și b) în locul amestecului de acid picrofucsin eozină. Colagenul fibrele țesutului conjunctiv după vopsire picrofucsin au culoare roșu aprins, iar mușchiul și fibrele elastice - roșu maroniu sau galben-verzui. Fier hematoxilină Weigert colorează nuclee de culoare maro închis sau negru-maroniu. Puteți nuanța nucleu și puternic Boehmer soluție hematoxilina (fără diferențiere).

soluţii de lucru

Hematoxylin Weigert preparată imediat înainte de colorare prin amestecarea de volume egale de soluții stoc Weigert (primul și al doilea) sunt stocate separat.
Soluție Weigert Origine: in 100ml alcool 96% s-a dizolvat 1 g doua soluție gematoksilina-: 4 ml de soluție 29% de fier (3+) clorură * condensat cu 1 ml de acid clorhidric puternic s-a adăugat și 95 ml apă distilată.

* În absența clorură ferică (3+) poate fi utilizată o soluție 2-3% de alaun feric.

După amestecarea a doua soluție se toarnă la prima soluție nu este egal, dar în cantități oarecum mai mici, iar apoi a doua soluție a fost adăugată la amestec prin picurare cu pipete de la o valoare egală cu prima soluție.
Prin variația tensiunii superficiale a soluției începe să se urce pe pereții unui vas (flacon probă) și colectat în picături mici, care re-flow în lichid. Acest fenomen indică raportul cantitativ corect prima și a doua soluții Weigert în amestec și apoi adăugarea unei a doua soluție care urmează să fie oprită. Dye, în cazul în care este gătit în mod corespunzător, de culoare violet profund. Dacă este maro, că există un exces de a doua soluție. Nucleul astfel încât vopseaua nu va fi vopsit în negru și maro.
soluții Weigert singur poate fi depozitat timp de ani, un amestec al acestora, nu mai mult de 3-4 zile, deci cel mai bine este de a utiliza o soluție proaspătă.
O picrofucsin soluție: până la 100 ml soluție apoasă saturată de acid picric S-au adăugat 4,10 ml dintr-o soluție apoasă 1% din fucsin.
Dacă o nevoie urgentă de a pregăti o cantitate foarte mică de soluție în flacon de penicilina filtrată se toarnă într-o soluție saturată de acid picric (jumătate din balon), și la acesta s-a adăugat în picătură soluție 1% de acid fucsin. În acest caz, controlul poate servi ca o picătură a amestecului pe hârtie de filtru, care ar trebui să aibă culoarea de sânge proaspăt.

colorit

1. Din secțiunile din transfer de apă distilată Weigert Hematoxylin pentru 2-5 minute. Miezurile colorate trebuie controlat sub microscop.
2. Clătiți secțiuni în apă distilată și se transferă în apa de la robinet timp de 10 minute (apa trebuie schimbata).
3. Pune secțiunile 1-2-3 min (uneori Vi min) picrofucsin.
4. Fast secțiuni (5-10s) au fost clătite cu apă distilată și țineți-le rapid în alcool 96% (poate fi modificat), în ilumineze carbol-toluen, toluen, și închise în Canada balsamul. Rezultat: fibrele de colagen de culoare roșu aprins și mușchi și elastic - galben-maroniu sau galben-verde. Kernel burokorichnevogo sau maro-negru.

Caracteristici de culoare.

Necesită monitorizare constantă la microscop. În cazul în care nucleele dobândesc o culoare maro, mai degrabă decât negru, este necesar să dețină secțiunile mai lungi în hematoxilină sau mai puțin picrofucsin deoarece picrofucsin a diferenția puternic de acțiune împotriva hematoxilină.
Dacă fibrele țesutului conjunctiv colorează intens roșie, apoi urmează o clătire mai picrofucsin felii în apă, în care fucsin acid dizolvat. Dacă, dimpotrivă, țesutul conjunctiv a fost pictat magenta pal, trebuie clătite rapid felii în apă sau chiar se clătește complet și imediat transferat la alcoolii.
Dacă o colorație slabă se obține cu acid picric (celule ale glandei, musculare netede), este necesar să se accelereze cablarea cu alcooli, deoarece au recuperat din acidul picric preparare. Când zugrăvirea preparare de acid picric este necesară pentru a crește timpul de staționare a tăiat în alcool.
Un dezavantaj semnificativ al acestei metode este agenți de albire, astfel încât acestea nu pot fi stocate pentru o lungă perioadă de timp. Acesta poate fi folosit cu hematoxilină Mayer, Karatsu, Ehrlich, dar hematoxilină Weigert oferă o mai bună culoare.

Colorarea țesut conjunctiv metoda Mallory

secțiuni de parafină colorate și tselloidinovye.
Metoda identifică bine diferitele elemente ale tesutului conjunctiv, in special fibrele de colagen și retikulinovye. Acesta poate fi utilizat pentru colorarea mușchilor și a altor țesuturi.
Material mai bine fixat în zăvoare sublimeze, în special în amestec Zenker.
Dacă materialul este fixat în formol, înainte de colorarea secțiunilor trebuie să fie plasate în lichidul Zenker timp de 15-30 min. Apoi, câteva secțiuni de minute au fost imersate într-o soluție alcoolică de iod, eliberând secțiunile din precipitatele diclorură de mercur. Secțiunile au fost plasate într-o soluție de 0,25% de tiosulfat de sodiu (hiposulfit) pentru a recupera iod.

soluţii de lucru

Este necesar să existe trei soluții de lucru.
Acidul apos fucsina 0,1%.
O soluție de acid fosfomolibdic 1%.
Un amestec format din anilină portocaliu albastru G și acid oxalic. Pentru prepararea amestecului colorantului de 0,5 g de anilină portocaliu albastru G 2 și 2 g de acid oxalic se dizolvă în 100 ml apă distilată. Acest amestec se încălzește la fierbere, se răcește și se filtrează. Atunci când componentele sunt dizolvate, amestecul devine de culoare brun intens cu o nuanță verzuie. O soluție adecvată pentru utilizare imediat după preparare. După o lungă de depozitare, înainte de utilizare soluție trebuie fiartă și se filtrează.

colorit

1. După eliberarea din secțiuni de parafină de apă distilată este transferată într-o soluție de fucsin 0,1% acid timp de 2-3 min.
2. Rapid spălate în apă distilată timp de 1-2 min.
3. Pentru fixare, secțiunile de colorare fucsin acide au fost transferate într-o soluție 1% de acid fosfomolibdic în 3-5 min.
4. Rapid clătite cu apă distilată.
5. secțiuni de transfer în svezheprofiltrovannuyu amestec de anilină portocaliu albastru G și acid oxalic timp de 1 minut (pentru a evita decolorarea).
6. Secțiunile au fost spălate în apă distilată.
7. Diferentiat in alcool 96% timp de 3-5 minute sau mai mult până la microscop par vopsit albastru fibre de colagen.
8. Este trecut prin alcool absolut, xilen, închis în Canada balsamul.

Rezultat.

fibre de colagen și retikulinovye slime albastru inchis - albastru, celulele roșii din sânge - roșu-portocaliu, fibrele musculare - luminos cromatină portocalie - rosu cu galben celule tinge, nevrogliei si ganglionare - rosu-purpuriu, granule secretorii - rosu.