Metoda dicroism circular - biomaterialovedenie - polimeri scop medical

Primii pași în utilizarea dicroismul circular (CD) în biomaterialovedeniya (și anume pentru biopolimeri de cercetare stereostructures) apartin autorului acestui capitol. Scopul a fost de a utiliza în comun metodele de UV și spectroscopie CD și analiza cantitativă a procesului de proteine ​​adsorbție suprafața polimer cea mai simplă și manieră ușoară, în condiții cât mai apropiate posibil de existent în mod natural în organism viu.

Fig. 78. Spectroscopia schematică diagrama dicroismul circular (CD). Explicația în text.

Fig. 79. Articolele Metoda diagrama KD folosind filmul polimeric acoperit cu cuvă mică.
Principiul general al metodei este reprezentat de KD schematic în Fig. 78. Fasciculul de lumină cade din sursa 1 (lampa cu xenon) pentru focalizare oglindă 2 și intră în monocromator 3 și mai departe la un element de polarizare 4. Aici, lumina polarizată monocromatică capătă o polarizare plană și apoi intră în cuva Pokelya 5, unde se împarte în stânga și polarizat fascicule rotație dreapta. Apoi, fasciculul trece prin cuva 6 polimer cu proba și intră în detectorul 7, care este un tub fotomultiplicator. Aici, diferența dintre extincția probei în raport cu razele polarizat stânga și dreapta circulară [34, 35].
Ca urmare a activității autorului și co-lucrătorilor. [36] o metodă de analiză a fost bazată pe utilizarea celulei de testare cu materialul de acoperire. Procesul tehnica este după cum urmează. Utilizarea cuvă de cuarț potrivit pentru spectroscopie UV, și o metodă pentru CD-ul. Pe suprafața interioară a unei celule sau pe suprafața garniturii introdus în acesta acoperită cu o peliculă de polimer examinat. Apoi, cuva este introdusă în soluția de proteină (pH 7,4- 37 ° C) și este pusă în contact cu polimerul pentru un timp predeterminat. Apoi, se spală bine cu o soluție tampon de fosfat cuvetă. În final, se umple acest tampon și a analizat aceeași probă prin succesive UV metoda spectroscopiei CD.
Figura 80. Curbele spectrale ale CD a-helix (1), p-structura (2) și bobina aleatoare (3).

Astfel, tehnica propusă permite determinarea practic simultană a cantității de polimer adsorbit de proteine, și marchează toate schimbările-denaturante degradant. Schema generală a unei astfel de tehnică este prezentată în Fig. 79.
Folosind un vârf UV la 220 nm, o curbă de calibrare pentru sângele albumină serică bovină (log I / I0 = e / I C - lungimea cuvetă, c - concentrația). Rezultatele analizelor a permis să se stabilească faptul că acest vârf >Ea nu depinde de modificările în denaturarea proteinei, determinată prin concentrația sa. Folosind Coeficientul ellipticity F222 la 22 nm, care a fost definit maniera KD a fost calculat coeficientul de [0] r22 numărul mediu de grupe reziduale ale proteinei adsorbite. Calculul realizat prin formula:
unde M0 - sold volum mediu egal cu 118.
Fig. 80 prezintă curbele spectrale ale CD a-helix, p-structura și bobină aleatoare. După cum se vede din curbe, una dintre trăsăturile caracteristice ale configurației profilului spectral ca CD-helix este faptul că la 222&nm și 208 nm rsquo-, acest circuit are două vârfuri negative, de mărime aproximativ egală. Este cunoscut faptul că un vârf negativ la 222 nm nu depinde de natura proteinei și de tipurile și cantitățile -40000, prin urmare, prin următoarea formulă de mai jos se poate determina procentul de proteine ​​din-o structură elicoidală.
Conținutul unui elicoidal structură,
Prin procedeul descris adsorbția albumine și globuline a fost investigată ca urmare a 15 secunde de contact cu

Complexe polyionic. Mai precis, ele manipulează complex, care a sugerat formula Tsuruta Teydzi.
Fig. 81 prezintă spectrele soluției de albumină și albumina adsorbită pe filmul de complex polyionic CD. Compararea curbelor spectrale sugerează că gradul de denaturare a proteinei este practic neglijabilă. Fig. 82 prezintă soluția Spectrele CD globulină și gamma-globulină, filmul adsorbit pe un complex polyionic.
O comparație curbele spectrale este evident că adsorbția determină o modificare semnificativă în structura spațială a proteinei.
Curbele din ambele grafice (Fig. 81, 82), că, chiar și după 15 secunde de absorbție pe stratul de suprafață de polimer este format din mai multe macromolecule proteice groase. De asemenea, sa constatat că conținutul y-globulină de p-structura variază între 16 și 31%, punct de topire. E. Foarte puternic.

In concluzie, trebuie subliniat faptul că, spre deosebire de metoda de ATR spectroscopie IR, metoda CD nu este conectat cu necesitatea uscării probelor și permite manipularea în condiții care sunt suficient de aproape de natural, deci poate fi justificat considerată ca fiind foarte promițătoare.
Fig. Spectrele 81. CD de soluție de albumină (A) și albumina adsorbită pe complexul polyionic filmului (B).