Colorarea și încheierea secțiunilor - baza de histologie

Video: Rezumatul specimenelor histologice sub o alunecare de acoperire.

Pentru felie preparate prin una dintre metodele de mai sus, a fost posibil să investigheze un microscop, este necesar ca componentele structurale ale țesuturilor constituente sunt bine perceptibile în lumina transmisă, și că tăietura este protejat de posibila contaminare și deteriorare. Prin urmare, o taie în continuare prelucrarea lor implică vopsire, albire și concluzie.

Observații generale

În ciuda faptului că secțiunile de pictura are o istorie lungă, pînă atunci complet obscur esența mecanismelor de acțiune a multor coloranți. Fără îndoială că numai că baza microstructuri tisulare de colorare sunt procese fizico-chimice. Din factorii fizici trebuie mai întâi observat fenomenul de difuzie (penetrare) adsorbție (suprafața de absorbție) și îndepărtarea (impregnare profundă) colorantului și solubilitatea substanței chimice - soluții electrolitice și proprietăți de vopsire a țesăturilor înseși. La fel de importante sunt densitatea țesuturilor și colorantul Răspândirea. Prima proprietate specifică secvența de colorare a structurilor individuale, a doua - viteza procesului de colorare.
Ea se bazează pe proprietățile separării electrolitice utilizate în practica vopselelor histologice în trei grupe: de bază, acide și neutre.
Colorantul de bază este o bază colorant sau a sării sale și vopsește structurile celulare și țesuturi de natură acidă, cum ar fi cromatină nucleu care conține ADN și endosome conținând ARN. De aici și bazofilie termen (bază iubitoare) pentru a desemna componente tisulare, colorarea cu coloranți bazici (tionina, hematoxilină, metil verzi etc.).
colorant Acid - un acid colorant sau o sare a acestuia, prin care materialul și particulele de natura de bază a colorat, de exemplu, granule de eozinofile, citoplasmă anumitor celule ale hipofizei anterioare, etc. De aici oksifiliya termenul (acidofil - acide iubitoare). Elemente de țesut colorat coloranți acizi. In acest grup de substanțe includ eozină, eritrozină, fucsină acide, congo roșii și altele.
Neutral compus colorant este format prin soluții apoase de coloranți acizi și bazici (colorant compus cu bază colorant de acid). Acest grup include Sudan, eozinovokisly albastru de metilen și alții.
A nu se confunda cu un amestec colorant neutru colorant neutru, caracterizat prin prezența simultană în soluție de coloranți bazici sau acizi. Neutrofiliei Termenul Același lucru este valabil pentru rezultatele colorării cu ambele grupuri coloranți, deoarece reflectă proprietatea colorantului nu, iar echilibrul dintre proprietăți acide și bazice ale elementelor acoperite.
Trebuie amintit faptul că calitatea culorii și a rezistenței sale poate avea o metodă semnificativă de fixare efect, pre și preparate post-tratament. De aceea, trebuie să respecte cu strictețe toate liniile directoare și regulile generale de colorare.
De asemenea, trebuie subliniat faptul că majoritatea coloranților histologice nespecifice, t. E. nu dezvăluie natura chimică a componentelor tisulare. Ele pot fi folosite doar pentru a studia caracteristicile morfologice ale microstructuri.
Coloranți utilizate în scopuri histologice, împărțite în naturale și artificiale.
Există mai multe tipuri de colorare histologică: progresiv, regresiv, directe, indirecte, simple și complexe.
Colorarea progresiva - este o metodă în care feliile sunt colorantului până la până când ajung la pătarea nivelul cerut.
Regression - vopsi primele secțiuni și apoi ajustate la culoarea dorită prin spălare cu un lichid adecvat, care permite distinge mai clar elemente tesuturi individuale.
Noi ar trebui să țină mereu în minte: a) lichidul jgheabului de îndepărtare atentă (în caz contrar aceasta va continua să funcționeze și va denatura rezultatul culorii) - b) utilizarea preferată a c subțire srezov-) că coloranții divorțate dau rezultate mai bune decât soluțiile puternice (grosime secționate și o concentrație ridicată a diferențierii colorantului dificile și să conducă la secțiuni de culoare inegale) - d) că culoarea trebuie efectuată sub controlul microscopului.
Utilizarea tehnicilor de colorare regresive necesită o anumită abilitate care se dobândește treptat.
Colorarea directă - colorarea obiectelor direct în soluție de colorant, indirect (mordant) - felie pătat colorant dorit numai după pretratare specială coloranți mordanți.
Într-un simplu colorare cu un colorant este utilizat. O formulare complex de colorare cuprinde tratarea mai multor coloranți (două sau mai multe), simultan sau succesiv (vezi. Hematoxilină-eozină metoda Van Gieson).
Toate metodele de colorare cu histologice pot fi împărțite în două grupe principale: a) Studiul utilizat pentru a obține reprezentarea totală estimată a obiectului în studiu (vopsite în principal nucleu și citoplasmă celulelor) - b) speciale, care permit să picteze exact țesutul celular si elementele care cercetătorii de interese (organitelor celulare, structuri fibroase, și așa mai departe. d.). Metodele care constituie al doilea grup, sunt mai complexe și necesită metode speciale de fixare.
În scopul de a obține rezultate bune cu orice metodă de colorare a preparatelor histologice, este necesar să se respecte anumite reguli.

1. soluții de colorare trebuie să fie curate, astfel încât orice colorant trebuie filtrată înainte de utilizare, iar soluția apoasă preparată numai cu apă distilată.

Fig. 77.
Locația de ochelari biologice (baterie) pentru secțiuni de prelucrare secvențiale lipite pe sticla (deparafinare, deshidratare).

1. Preferați: a) colorării o concentrație scăzută pentru o lungă perioadă de timp înainte de colorantul tranzitorie ridicată kontsentratsii- b) utilizarea tehnicilor de regresie.
2. efectua cu atenție toate procedurile în curs de pregătire pentru pictura tăiat și post-procesare.

tehnica de colorare

pregătire în avans. Înainte de a începe colorarea secțiunilor, acestea sunt de obicei supuse la o tratare prealabilă specială, a căror natură depinde de materialul și de fixare metode secționare.
secțiuni de parafină necesită formarea mai sofisticate. Deoarece ceara nu are suficientă transparență și obstrucționează procesul de colorare (coloranți histologici - este soluții apoase sau alcoolice, slab penetrante țesut în parafină), acesta trebuie îndepărtat din tăietura. Pentru această reducere este supus deparafinare - un proces invers celui efectuat în timpul pregătirii obiectului de umplere în parafină, secționate adică secvențial prin parafinice concentrației solventului alcooli jos și plasate în apă ... În practică, acest lucru se realizează acest lucru.
Se poate înlocui alcool 96% pentru a înlocui o porțiune de etanol absolut, și în loc să utilizeze 70% 80% sau 60% alcool. Este important să se păstreze numai conceptul.

Etichetarea cupe biologice (sau flacoane de cântărire de mare), sunt turnate în soluțiile respective și puse în ordine (fig. 77), care permite efectuarea de manipulări asupra schemei următoare.
Notă. În cazurile în care materialul a fost fixat în lichide care conțin secțiuni diclorură de mercur trebuie supuse prelucrării ulterioare, după plasarea lor in 96 ° alcool alcool iodat. Timpul de rezidență al secționării soluției a fost ajustat în mod empiric prin observarea la microscop pentru dizolvarea precipitatelor diclorură de mercur. Deoarece iod afectează negativ mulți coloranți se îndepărtează prin secțiuni după tratament (după 70% alcool) soluție giposulfata 0,25% până la dispariția culorii gălbui. Apoi produc spălarea giposulfata în apă distilată.
sectiuni Tselloidinovye pot fi vopsite fără a îndepărta celloidin. În aceste cazuri, feliile de alcool de 70% (în care sunt depozitate sau în care sunt colectate în procesul de tăiere) a fost transferat în alcool 50% și apoi în apă distilată. Dacă colorant pata celloidin utilizat, acesta din urmă este îndepărtat prin plasarea felia într-unul dintre celloidin solvent (un amestec de cantități egale de etanol absolut și eter, acetonă, alcool metilic). După slice dizolvarea celloidin a fost tratat în același mod ca și în deparafinarea (descendentă alcooli - concentrație de apă).
secțiuni Gelatina eliberat din gelatină, plasarea într-o apă distilată ușor acidulată este încălzită la 37 ° C Dacă unitatea este supusă compactării în continuare în formol, apoi îndepărtați gelatina nu este posibilă, și că, în unele cazuri, pot împiedica microscopia.
extemporaneu nu necesită pre-tratament, deoarece, de obicei, acestea sunt colectate în timpul tăierii în apă distilată.
Pre-procesare și post-vopsire poate fi supus atât lipite pe slide-uri și secțiuni de liber-plutitoare. În primul caz, utilizați cupe biologice, celule speciale, de mare cântărire sticle. Pentru a spori productivitatea, ochelari cu felii suprapuse în partea de perechi, nu muchia suport (înapoi) între ele și aranjate într-un triunghi (Fig. 78), sau (în recipient mai mare) plasate perechi, una după alta, separate printr-un folosind diverse instrumente (sticlă sau metal cu plăci curbate, și așa mai departe. d.). Pentru a lucra cu liber-felii folosite pahare de ceas, sticle cu o greutate scăzută sau cupe. Nu sunt ware felii lipite este transferată de la una la alta cu un pahar (sau metal) a cârligului sau spatula și sticlă - cu ajutorul unei pensete.

Fig. 78.
Locul de amplasare de sticlă cu felii din cupa.
Ustensile trebuie să fie etichetate în mod clar și aranjate într-o anumită ordine, oferind secvența de funcționare dorit.
Notă. La transferarea secțiunilor de la o soluție la alta trebuie să se asigure că porțiunea ulterioară a fluidului cât mai puțin posibil poluate anterior (în special atunci când se deplasează de la alcool xilen). Pentru a face acest lucru, se transferă diapozitivele și secțiuni libere-plutitoare încearcă să ofere scurgerile maxime de lichid, asigurând în același timp, pentru a se asigura că reducerea nu este uscat (uscare tăiate sensibil whitened). Lamele au fost așezate în perechi, trebuie să vă deconectați și să se usuce spatele hârtiei de filtru sau pânză rapid, având grijă să nu se amestece în lateral. Ar trebui să fie, de asemenea, atenți la coborârea și îndepărtarea feliile din sticlă, pentru că în acest caz, poate fi zgâriat secțiuni.
Ar trebui să fie schimbat în timp util soluții, împiedicându-le de la poluarea excesivă.
Dacă feliile în cursul prelucrării ulterioare provin unstuck din sticlă (folosind soluții acide sau alcaline distincte sau lipire insuficient de durabil), atunci aceasta poate fi corectată prin aplicarea tselloidinovuyu protecție. Pentru această secțiune a secvențial plasat în apă 70% și 96% alcool, apoi sticla este imersat într-o soluție de 0,5-1% celloidin, îndepărtat, lăsat să se usuce ușor (pentru a nu termina uscare!) Și plasat în alcool 70%.

Fig. 79.
Dispozitiv pentru prelucrarea simultană a unui număr mare de pahare cu felii.

Rezultatul acestor manipulări felie și porțiunile adiacente ale culisei tselloidinovoy acoperite de un film subțire, și prin care se realizează prin consolidarea felie și pe sticlă. După aceea, secțiunile au fost clătite cu apă distilată și se colorează.
Care transportă colorare. Când secțiunile colorate au fost transferate coloranților apoase de apă distilată și colorare cu alcool - de alcool direct la soluția adecvată de colorare concentrație (colorația directă) sau în primul decapantului lichid (colorație indirectă). Atunci când medicamentul dobândește intensitatea culorii dorită, se spală în apă (sau alcool) pentru a îndepărta excesul de colorant și apoi, dacă este necesar, se diferenția într-un lichid adecvat. Excesul de colorant este spălat atâta timp cât el nu încetează să se deplaseze de la tăietura în lichidul de spălare.
Colorarea secțiuni lipite de sticlă, se pot efectua atât prin plasarea lor într-o soluție de colorare și un colorant nakalyvaniya forfecare. In primul caz utilizat pahare din sticlă, cuvete sau rafturi speciale metalice, permițând în același timp pentru a picta un număr mare (40-50) din sticlă (Fig. 79). Pentru colorarea înțepătură în plăci plane sau tăvi sunt plasate tije de sticlă paralele, care sunt așezate pe lamele de sticlă. Pentru a nu se lipi deplasat, capetele lor sunt conectate printr-un tub de cauciuc. După aceea, forfecare prin soluția pipetă nakapyvayut
colorant. Dacă pata este lung, pentru a evita evaporarea localizarea colorantului felie este acoperit cu o sticlă de ceas mic sau o cană. Un efect similar poate fi realizat prin plasarea lamelor cu colorant picurată într-un vas Petri, în același timp, punând un număr de lână înmuiată în apă. După ce cupa este închisă, umidificarea are loc, ceea ce conduce la o soluție semnificativă scădere a colorantului evaporare. Colorat gratuite secțiuni ca în pregătirea prealabilă, sunt în Buxy sau pahare de ceas.

Video: H & E pata

Video: PAO FNKTS: culoare și concluzii complexe Prisma-Film