Prelucrarea și colorarea decalcifiere osoasă, colorarea - baza de histologie

Prelucrarea și colorarea țesutului osos

proprietăți fizice osoase este unic printre țesuturile corpului. Prezența sa în substanța intercelulară a sărurilor de calciu conferă duritate țesutului, complicând în mod semnificativ prepararea preparatelor histologice, totuși tratamentul țesutului osos are propriile caracteristici. Există două metode principale pentru preparatele histologica: 1) prepararea feliilor după tratare prealabilă specială a obiectului, esența care la dizolvarea și îndepărtarea sărurilor osoase anorganice (decalcifiere) - 2) prepararea unei plăci osoase subțiri (secțiuni subțiri) de piese os compact nefixate prin polizare cele mai recente.

decalcifiere

Înainte de a trece la decalcifierea, osul ca orice țesut, trebuie supuse fixării. Alegerea blocare depinde de scopul și natura studiului. Astfel, preparatele pentru revizuirea și identificarea componentelor fibrilare ale osului sunt utilizate formol pur (soluție 15-20%), în timp ce pentru studii citologice clemelor complicate preferabile, care conțin de asemenea formalina, deoarece reduce gradul de umflare a structurilor fibroase în timpul țesut de prelucrare ulterioară (de ex , Shtive retinere: - 76 ml, formol - 20 ml acid acetic glacial - 4 ml) diclorură de mercur soluție apoasă saturată.
Pentru fixarea puzzle care urmează să fie tăiat bucăți mici de os (0.5-1 cm grosime), deoarece datorită încuietoarea mare densitate penetrează tesutul lent. fixarea timpului depinde de grosimea piesei (cel puțin 48 de ore).
La sfârșitul obiectului Fixing spălat bine în apă de la robinet sau alcool (de exemplu, după fixatori complexe conținând diclorură de mercur), precum și în acizi de prelucrare ulterioare pot forma precipitatelor greu solubile. Ulterior, pentru a efectua formularea de degresare printr-o serie de concentrații în creștere ale alcoolilor (50, 70 și 96%) și apoi ajustate la o concentrație de apă prin alcooli downlink.
Decalcifiere se realizează prin tratarea osului folosind decalcifiază având proprietăți de fluid de dizolvare a sărurilor anorganice, fără a deteriora elementele osoase structurale.
Când decalcifiere trebuie să respecte următoarele reguli de bază:

1. aplica o cantitate mare de decalcifiere lichid și înlocuiți-l în fiecare zi (cantitatea de lichid trebuie să depășească volumul obiectului de cel puțin 50-70 de ori);
2. obiect dekaltsiniruemy plasat în lichidul de strat superior pentru a se asigura că reducerea sărurilor solubile inferioare (agățat piese pe un fir sau o sită de sticlă);
3. efectueze decalcifiere pentru a elimina complet săruri minerale (dar nu și materialul perederzhivat în lichide, deoarece aceasta duce la umflarea și deteriorarea fibrilă structurilor de colorare).

Decalcifiere este considerată completă atunci când obiectul devine moale și ușor de tăiat cu un cuțit și fără criza. Proceedings procesului poate fi verificată prin gradul de imersiune în obiectul ac de disecție. Cranking de droguri și să apăsați nu este recomandat, deoarece acest lucru va deteriora structurile osoase delicate.
Decalcifieri într-o soluție apoasă de acid azotic (5-7,5%) este cea mai comună metodă. Pentru a prepara soluția de lucru se toarnă într-un vas de măsurare 5-7,5 ml de acid concentrat azotic grad reactiv (densitate 1,40) și se diluează până la 100 ml cu apă distilată (soluție poate fi preparată pentru utilizare ulterioară în cantități mari prin calcularea cererii totale). Aplicați concentrația mai mică și mai mare a soluției nu este recomandat pentru decalcifiere osoasă, deoarece prima cauza umflarea, iar al doilea - structuri celulare daune. Concentrațiile mai mari (10%) a fost folosit numai pentru decalcifierea dinților.
Turnând cantitatea dorită de lichid într-un vas de sticlă adecvat, acesta este atârnat la o bucată pregătită de decalcifierii osoase. Soluția a fost înlocuită zilnic până la decalcifierea completă. timpul decalcifiere depinde de proprietățile obiectului (valoarea densității) și o concentrație de acid azotic. Durata medie a decalcifiere bucăți mici de os cortical 10-12 zile.
La finalizarea decalcifiere pentru a elimina umflarea structurilor fibroase de droguri suspendat timp de 24 de ore într-o soluție 5% de sulfat de sodiu sau litiu (în absența unei astfel de săruri osoase trebuie să fie plasate într-un alcool 96%) și numai apoi spălat cu grijă pentru 1-2sut în apă de la robinet .
Poate scurta obtine os decalcifiat, plasarea piesei retezate direct în soluție de acid tricloracetic 5% conținând 10-20% formaldehidă. Acest amestec capturează și decalcifiere simultan. O mică bucată de densitate medie poate decalcifia timp de 3-5 zile. După decalcifiere spălat în alcool (în orice caz, nu în apă!).
Există o serie de alte moduri de decalcifiere, dar ele se bazează toate pe același principiu, necesită respectarea regulilor generale menționate mai sus.
După decalcifierea țesutului osos poate fi tăiată pe un microtom de congelare și turnată în celloidin sau celloidin-parafină în maniera obișnuită. Completați ceara nu este recomandată, deoarece este slab pătrunde os decalcifiat.
În prezent, industria internă a început să producă de construcții de tip sanie microtomul care permite să taie osul fără decalcifiere pre, rezultând secțiuni de 20-50 microni grosime.

colorit

Cea mai comună metodă pentru colorarea secțiunilor de os decalcifiat - la SHmorlja (acid tioninpikrinovaya). soluții de lucru: A - o soluție saturată de tionina în alcool 50%, B 1% fenol soluție apoasă B - O soluție saturată de acid picric.
Înainte de utilizare, golirea 1 parte soluție A cu 10 părți de soluție B din secțiunile de apă au fost transferate timp de 10 minute în amestecul rezultat, și apoi se clătește cu apă distilată și plasate într-un 30-60 cu o soluție saturată de acid picric. Secțiunile au fost apoi clătite din nou în apă distilată și diferențiată în 70 ° etanol pentru a se obține o culoare roșu închis. Ei au fost apoi transferate într-un alcool de 96 °, care a continuat diferențiere (sub controlul unui microscop), atâta timp cât contextul general al tăieturii nu va primi korichnevyy4 (sau marsh) de culoare și celule osoase și procesele lor - rosu. secțiuni colorate au fost apoi realizate la 96% și alcool absolut, carbol-toluen, toluen, și încorporate în balsamul.
Dacă felia este colorat slab din cauza decalcifierii prelungite în acid azotic, acesta trebuie mai întâi așezați apa de amoniac, apoi se spală bine în apă distilată și apoi se colorează timp de 2-3 ore în 0,5%.