Prepararea și frotiuri de sânge pentru numărului de leucocite - baza histologie

Pentru analiza morfologică a celulelor sanguine și a frotiului de sânge de leucocite de numărare este preparat. În mod corespunzător făcut și frotiu bine colorat, este o condiție indispensabilă pentru obținerea de rezultate fiabile în studiul caracteristicilor morfologice ale celulelor sanguine și numărarea leucocitelor. frotiu de sânge trebuie să îndeplinească următoarele cerințe: 1) începe de la 1 cm de la începutul și sfârșitul slide la o distanță de 2-3 cm de la marginea sa opusă, lungimea totală a cursei trebuie să acopere 1 / 2-3 / 4 stekla- 2) au o grosime uniformă, mai degrabă decât ondulator, bun frotiu mai gros decât la început, și apoi treptat subtiaza capete ale pistei ( „perii vizualizare“) - 3) stratul de sânge nu trebuie să ajungă la marginile sticlei, între aceasta și marginea geamului trebuie să fie întotdeauna câțiva milimetri de spațiu.
Strokes care depășesc 3/4 din lungimea de slide, sunt foarte groase. Ele sunt un strat gros de celule roșii din sânge, sunt presate unul față de celălalt și formează un coloane de monede care impiedica investigatorii considera morfologia lor. Strokes mai scurt Vi diapozitiv prea subțire: celule albe din sange sunt foarte rare și sunt deformate. Dacă nu există nici un frotiu liber marginea glisiera (care se întâmplă atunci când un diametru mare de sticlă de măcinare), celulele mari sunt mutate la marginea accident vascular cerebral, rezultând inegal distribuite în aceasta.
Distribuția ondulatorii de celule sanguine frotiu asemenea greșite - secțiuni groase conțin mai multe limfocite, subtiri - mai multe monocite și celule segmentate.
Tehnica de pregătire frotiu. Lamelele, care va face frotiurilor de sânge, trebuie să fie bine degresate și spălate. În acest scop, ele sunt plasate într-o soluție de bicromat de potasiu (amestec K2Sg2O7 + puternic H2 SO4) timp de 24 de ore (cu Chrompick trebuie manipulate foarte atent, deoarece aceasta poate bâlbâi de la haine de arsuri, ciorapi). Apoi paharul se spală în jet de apă timp de 24 de ore, sters uscat și plasat într-un borcan cu un amestec de spirt- eter. acestea sunt uscate înainte de utilizare. Prin picătură de sânge a atins diapozitiv, astfel încât să nu atingă degetul. O picătură de sânge pe sticla trece. Pentru frotiu a fost valoarea 1 / 2-3 / 4 a diapozitivului, diametrul picăturii ar trebui să fie de 2-5 mm. Glisiera de sticlă luate în degetul mare mâna stângă, arătător și degetul mijlociu, astfel încât o picătură de sânge a fost pe partea de sus. Se taie sticla, ceea ce va face accident vascular cerebral, a aruncat un unghi de 30-45 ° la o distanță de 1-2 mm în fața meniurile, ținând degetul mare și arătător al mâinii drepte său. sticla Cut este glisat înapoi, astfel încât acesta a atins o picătură de picătură de sânge și se împrăștie în colțul dintre sol și glisiera (mișcarea înapoi, de asemenea, ajută la eliminarea excesului de sânge, în cazul în care scăderea a fost prea mare). Apoi, repede înainte mișcarea mâinii face frotiului. Este necesar ca, în pregătirea unui degetul mare și arătător frotiu de mâna dreaptă a alunecat pe marginea diapozitiv și pentru a crea suportul necesar pentru impunerea unui strat uniform de sânge. sticlă tăiate ar trebui să fie mai îngustă decât obiectivul de a aluneca marginile au fost libere de accident vascular cerebral.
Dacă geamul la sol este aceeași lățime ca obiect, colțuri rupte la geam la sol scurtare 1-2 mm. Cut sticlă poate fi înlocuită cu un capac.
Prepararea unui frotiu bun de sânge, cu toate că nu este dificil, necesită o anumită abilitate. Trebuie amintit că este gătită greșit accident vascular cerebral conduce la erori grave în rezultatele cercetării. Calitatea frotiului este într-o oarecare măsură, „certificat“ funcționează un laborator.
Colorarea frotiuri de sânge. Preparat în acest mod este uscat pete de sânge și apoi fixate cu metanol (3-5 min) și etanol absolut (100%) (10-15 min) sau acetonă (5 min). Cele mai bune rezultate sunt încă fixarea frotiurilor alcool metilic *. Fluidul de fixare denaturată proteinele celulare păstrând în același timp structura lor durata de viață și frotiuri fixate pe lamele de sticlă. Frotiurile nefixate spălate cu ușurință off.

* Rețineți că metanolul este o otravă puternică și acetonă inflamabil și exploziv lichid, motiv pentru care acestea nu pot părăsi locul de muncă (înainte și după utilizare), feluri de mâncare să fie etichetate în mod clar și depozitate în soluție trebuie să fie sigură.

celule sanguine:: Video celule roșii din sânge, celule sanguine albe (Nauchfilm, video educațional al URSS)

Lichidul de fixare este turnat într-o cantitate suficientă pentru sticlă sau sticlă cu frotiuri sunt scufundate într-un borcan de fixativ. După fixarea și frotiuri de uscare începe să coloritul lor. Metoda Romanovsky-Giemsa este utilizat de obicei. În laboratoare, există întotdeauna o soluție diluată de colorant gata. Romanowsky-Giemsa colorantului este alcătuită din părți (eozină) de acid alcalin (azuriu II) și. Azure II pata structura celulei în albastru strălucitor și eozină la rozovokrasnogo. parti alcaline ale celulelor sunt legate și colorate cu coloranți acizi și a acidului - alcalin.
Soluție de colorare lucrare a fost preparată prin diluarea soluției finite apă distilată (1-2 picături de cerneală per 1 ml de apă distilată). Pentru buna colorare cu frotiu colorant calitatea materiei, apă și temperatura de reacție. Este important ca apă distilată, în care este dizolvat un colorant, a avut o reacție neutră. Dacă reacția este acidă, acțiunea unei componente de celule albe din sânge colorantă slab alcaline sunt pătate slab și medicamentul devine roșu. Dacă apa este alcalin, efectul de slăbire a elementului colorant acid, leucocitele sunt colorate prea intens și medicamentul este albastru. Reacția este verificată prin proba de apă hematoxilina. În 4-5 ml de apă a fost aruncată pe peleți hematoxilină. Dacă apa de reacție a tselochnuyu fi apoi colorate mai devreme de 3 minute. Dacă se observă pata după 5 minute, sau nu se produce, atunci apa este acidă. Dacă apa este vopsit după 1-4 minute într-o culoare roz-violet, este neutru și este utilizabil. Când s-a adăugat în picătură apă acidă la aceasta o soluție de carbonat de sodiu 1% până când caracteristica probei hematoxilină nu devine apa neutra. Atunci când se adaugă, în picături, o soluție de 1% acid acetic o reacție alcalină. Pentru a evalua în mod adecvat rezultatele eșantionului, un pahar de apă ar trebui să fie pus pe o foaie de hârtie albă.
frotiul colorat produse prin metoda Romanowsky-Giemsa după cum urmează. Înainte de vopsire, trebuie să verificați mai întâi calitatea de coloranți, culoare și vizualizarea câteva lovituri pentru a seta timpul pentru cea mai bună colorare. Soluție de colorant Munca este preparată imediat înainte de vopsire. Medicamentul a fost plasat pe jos, accident vascular cerebral 2 Tije de sticla (lemn), așezată pe fundul plăcilor Petri. Se toarnă vopsea în curs de pregătire. Pătate 20-40 minute. Apoi, frotiu se spală sub jet de apă, se usucă și se mikroskopiruyut.
Când se colorează frotiul de sânge pe metoda Romanovsky-Giemsa, celulele roșii din sânge sunt vopsite in roz pal, nuclee de celule - în granule albastru-violet de eozinofile - in rosu aprins, bazofile - în albastru, citoplasmă limfocite și monocite - albastru.

Video: haemoscanning -"trăi" o picătură de sânge pe un microscop TS