Ultratom - baza de histologie

Video: esofag. ESOFAGULUI. La microscop.

Video: Splina. SPLINĂ. Se taie într-un microscop electronic.

Ultratom (principiile de bază ale dispozitivului și secționarea)
Electron studii tehnica microscopică a obiectelor biologice de la început se confruntă cu dificultatea de a obține un suficient subțire (10-30 nm) secțiuni ale obiectelor studiate. La grosimea mare a imaginii unor structuri ca în cazul în care „suprapuse“ pe imaginea altora și învățarea lor devine imposibilă.
Pentru a depăși această dificultate permite echipament de taiere ultra-subțire. În acest scop, folosind dispozitive speciale - ultratome. cele mai utilizate pe scară largă a plantelor ultratome Sumy și compania suedeză „LKB“ în țara noastră. Mai puțin probabil să utilizeze dispozitivele companiei austriece „Reichardt“ și unitatea cehoslovac „Tesla“ (Fig. 73).
Principiul de bază în ultratome mai modernă este dilatarea termică a tijei metalice, care permite staționare obiect micro și fixat la un cuțit de sticlă.

Fig. 73.
Ultratom.
stanina- fier 2 - - 1 iluminat home mikroskop- 3- 4 - transportă sterzhen- 5- tabel pentru nozha- sticla 6 - telecomanda.

Pregătirea secțiunilor ultrasubțiri precedate de o serie de operațiuni pregătitoare:

Video: Embriologie. 1. Progenez. Perioada inițială: fertilizare

1. de fabricare a sticlei nozhey- cele mai utilizate în cuțitele laboratoriyah- electron-microscopice fabricate imediat înainte ca instrumentul ultratome „nozhedelatele“ benzile lor de anumite clase de sticlă;
2. pregătirea unui grile de susținere pentru secțiunile ultrasubțiri - aplicarea unui strat de grilă Formvar, colodiu, carbon;

3) Pregătirea pentru ultratome. Această etapă se numește unitate de ascuțire: porțiune a obiectului care urmează să fie tăiate pe ultratome, pe un piramitome dispozitiv special în formă de patrulater trunchiate piramida (cu un vârf având o formă trapezoidală).
Urmatorul vine momentul cel mai important - producerea de prima felie ultra-subțire a obiectului momentului. Pentru a face acest lucru:

1. ultratom includ;
2. blokoderzhatele unitate sigură;
3. o tavă montată pe lichidul de cuțit este colectat pe suprafața care taie, fixați cuțitul în instrumentul în poziția dorită;
4. aduce muchia de tăiere a lamei cea mai apropiată de suprafața unității feței superioare ascuțit (de obicei, acest lucru se realizează prin „highlight intermitent“ ultratome din iluminatorul pe o suprafață netedă a feței superioare a blocului);
5. umple cada cu cuțit de lichid (apă distilată de multe ori), pentru a primi primul full tăiat manual obiectul;
6. permite funcționarea automată a dispozitivului la grosimea dorită a feliilor;
7. secțiuni obținute montate pe grila de susținere și un drenaj filtru, plasat într-un container de transport și depozitare grătare cu felii ultrasubțiri.

Rezultante Secțiunile ultrasubțiri necesită o prelucrare ulterioară (precum lumină microscopică) în vederea identificării structurilor necesare ale obiectului cercetării. Pentru aceste secțiuni ultrasubțiri de pe grilele de suport sunt tratate cu soluții de anumiți coloranți. Cel mai frecvent utilizat pentru acest scop soluții de plumb și acetat de uranil.
În unele cazuri, succesul studiului depinde de compararea datelor de microscopie electronica si studiu de lumina-optice, cu aceeași structură a obiectului. În acest scop, preparat semithin secțiunile 1-2 microni (1000-2000 nm). Acestea pot fi obținute ca ultratome și pe piramitome. Secțiunile au fost apoi montate pe un lame de microscop convenționale și colorate, în conformitate cu obiectivele studiului. Cea mai comună metodă este colorarea secțiunilor semithin cu o soluție apoasă de albastru de metilen 1% și 1% borat de sodiu (borax) (1: 1).
Trebuie subliniat faptul că seturile de mai sus doar principiile generale pentru pregătirea materialului pentru investigarea microscop electronic. Pentru familiarizare în profunzime cu metodele de microscopie electronică, a se vedea literatura de specialitate. În opinia noastră, suficient de calificat și în același timp este disponibil, această problemă este descrisă în cartea lui B. Weekley «Microscopia electronică pentru începători“ (Wiley, 1975).