Prepararea tselloidinovyh secțiuni - baza histologiei

Video: Etapele de fabricare a preparatelor histologice

Video: EGG MEN histologie testicul

cuțite de tăiere sunt folosite tselloidinovyh blocuri de tip A și B cu unghiul de înclinare ceva mai mic decât atunci când tăiați bloc de parafină. Unghiul de tăiere trebuie să fie acută și depinde de densitatea blocului (bloc mai moale decât unghiul ascuțit). Fixarea și blocul de formare pre-implementare produce precum și în prepararea secțiunilor de parafină. În timpul cuțitul de tăiere, iar blocul este în mod constant umezit cu alcool 70-80%. secțiuni Tselloidinovye sunt mai mici decât parafina, tendința de a cheagului și nu a lipi cuțitul. Prin urmare, în cazul torsiunii poate fi întins cu o perie direct pe suprafața lamei.
secțiunile tselloidinovye Ready au fost colectate în alcool de 70%, în cazul în care acestea sunt depozitate până prelucrare ulterioară, care poate produce atat free-to-felie, iar după preliminară lipirea lor pe lame. În acest ultim caz, în contrast cu parafină secțiuni de încleiere este efectuată în mod direct, înainte de colorare. Una dintre cele mai comune metode este Rubashkina. Felia tselloidinovy ​​expandat a fost transferat cu o spatulă pentru proteină gresate diapozitiv cu glicerol (cu nevoia de a trece cât mai puțin posibil alcool) si presata pliat neted hârtie de filtru. Apoi se toarnă în felii ulei de cuisoare pur. Dupa ce complet antireflex (5-20 min), ulei, o lamelă de sticlă, cu tăietură în 96% sau alcool absolut, care a înlocuit de 2-3 ori 5-10 min (pentru umflare celloidin) decantat. Ulterior, pentru a completa secțiunile celloidin dizolvare lipite este transferată în alcool-eter sau alcool metilic și apoi transportate printr-o concentrație alcoolică descendentă (în apă).
Preparare secțiunilor celloidin-parafina nu diferă de secționare de blocuri de parafină în timpul tăierii, lipire - de asemenea.

TĂIEREA microtomul congelare

De obicei, pe un material tăiat de congelare microtom, fixate în formalină sau alcool, și umplute în gelatină. Fixation în lichide care conțin diclorura de mercur nu este recomandată deoarece prezența mercurului degradează calitatea de tăiere (lama deteriorată).
Înainte de a trece la pregătirea materialului de tăiat pe un microtom de înghețare, trebuie să verificați dacă dioxidul de carbon din rezervor și în cazul în care acesta ajunge în tabelul de congelare. Pentru a face acest lucru, se deschide supapa cilindrului cu dioxid de carbon și rotiți butonul care reglează debitul de gaz.
Tăierea materialului care urmează să fie fixat este plasată într-un recipient de apă care curge și se spală de câteva ore (de obicei puse peste noapte). Apoi, se taie o bucată de grosime 4,6 mm și plasate într-o cană de apă distilată.
Securizarea mici microtomice tip cuțit șuruburi bar C tăietor în fantele, unghiul de înclinare este stabilită la aproximativ 45 ° și este retras în poziția de capăt din spate. piesă preparată este apoi îndepărtată din materialul de apă, așezată pe suprafața umezit a camerei de congelare sau căptușeala hârtie de filtru umectată și este orientat în poziția dorită. După această scurtă închiderea și deschiderea furnizarea robinet de dioxid de carbon produc înghețarea materialului. Pentru a accelera camera de congelare cu medicamentul este acoperit de sticlă cu pereți groși speciale în cadrul setului microtom. În cazul în care nu este disponibil, putem găzdui un pahar de sticlă de laborator de dimensiuni adecvate. Concomitent cu înghețarea obiectului care trebuie răcit pentru a produce un cuțit, alimentarea dioxidului de carbon prin tubul destinat acestui scop.
end Freeze (cum este recunoscut de durificare și albire de droguri) montat la scară micrometrică pentru grosimea slice dorită și prin plasarea unui cuțit pe obiect, rotirea mânerului ridică masa de alimentare cu o bucată de material la nivelul lamei de cuțit. Apoi, mișcarea cuțitului de mânerul în sine începe materialul de tăiere. Atunci când fiecare braț de plumb, în ​​măsura înapoi ca un tabel cu un medicament este ridicat în mod automat la o înălțime predeterminată. Felia este îndepărtat cu un cuțit deget sau perie și plasat într-o cană de apă distilată, în cazul în care acesta imediat este îndreptat. În cazul în care reducerile au nevoie pentru a economisi ceva timp, după îndreptare în apă, acestea ar trebui să fie în soluția de formol 10-12%.
blocuri Gelatina sunt tăiate în același mod pentru răcirea doar a unui primorazhivanie mai lungă și se produce dacă nakapyvat pe masa nu este apa, iar soluția de gelatină să fie impregnat obiect. Calitatea tăierii este de asemenea îmbunătățită, dacă după prima unitate de congelare să se dezghețe și apoi îngheța din nou. Colecteaza feliile trebuie sa fie apa rece sau la 30 ° alcool, în cazul în care acestea sunt ușor îndreptate. Dacă este necesar, secțiunile de depozitare sunt transferate în soluție de formalină 10%.
S-a obținut cu ajutorul secțiunilor microtomice de congelare au fost tratate în principal, liber schimb. Cu toate acestea, dacă este necesar, acestea pot fi pre-lipite pe o lamelă de sticlă. Pentru a face aceasta, ei sunt plasați în alcool 30%, apoi transferat într-un diapozitiv de sticla, proteina lubrifiat cu glicerol, îndreptat și presate netedă cu hârtie de filtru, umezit la alcool 30%. Secțiunile au fost transferate într-un amestec de 50 ml de alcool 50% și 7,5 ml de formalină (1 min), se spală bine cu apă distilată și se colorează.
Prepararea feliilor de calitate de material proaspăt, nefixate pe un standard de congelare microtom dificilă, mai ales în cazul în care prelucrarea ulterioară nu permite fixarea (de exemplu, depistarea histochimice enzimelor).
Cele mai recente modele de microtom de congelare interne și externe au adaptări speciale să se răcească lama. Dacă designul vechi microtom, este posibil să se răcească lama, adaptarea la acestea lotochek cu gheata uscata.
La tăierea blocurilor congelate nefixate răcite secțiuni cuțit nu sunt îndepărtate și pot fi transferate în mod direct la o perie microscop rece diapozitiv, la care aderă și uscate pe adezivi fără unelte.
Ca și în completarea mediului special în timpul tăierii pe un microtom de congelare, preparare simultană a secțiunilor din două piese. Pentru acest obiect să fie comparat este tăiat bucăți de diferite forme, au un număr de pe masă, înghețate și tăiate nu este aceeași formă de tăieturi face ușor să se facă distincția între ele. Tratamentul ulterior se efectuează simultan și după colorarea secțiunilor comparate plasate pe un diapozitiv este pregătit și preparat combinat.
Cu toate acestea, cele mai bune bucăți de țesuturi proaspete congelate sunt într-o unitate de refrigerare specială - un criostat.
Tehnici de bază pentru lucrul cu criostatului. Înainte de a lua materialul pentru prepararea extemporaneu într-un criostat, care urmează să fie pus în camera microtom cuțit, pensula, bisturiului, ac de disecție și suport pentru pahare includ un criostat unitate de răcire și să aștepte până când ajunge la regimul de temperatura camerei de lucru (-12 -15 °). Materialul a fost apoi plasat pe o lovitură blokoderzhatel microtom, pre-umezită cu apă de suprafață, orientate în poziție și ingheata (este posibil să se utilizeze gheață uscată, dioxid de carbon, eter de petrol, cloretil).
Dacă materialul trebuie să fie luate de urgență și nici timp să aștepte până când criostatului intră în modul de operare, blokoderzhatel cu obiect primorozhennym ar trebui să încheie folie rece sau puse în flaconul de cântărire răcit pentru a preveni înghețarea umezelii și plasate în frigider congelator (cu condiția ca temperatura să nu există mai mare decât - 8-10 ° C). Principala cerință - nu dau aparatul să se dezghețe. Puteți stoca blocuri congelate în termen de câteva zile. Blokoderzhatel transferarea obiectului într-o cameră de răcire, acesta este împins pe un microtom. Apoi, cu ajutorul bisturiului deja răcit în camera atașată la o bucată de forma dorită, este fixat cuțitul microtom și începe de tăiere.
În cazul în care gradul de răcire al obiectului este preluat corect (pentru un material de diferite densități necesită condiții de temperatură inegale) și anticoagulant bine dispozitiv reglat, secțiunile se potrivesc bine pe cuțit. Prin răsucirea secțiuni trebuie să fie răspândite pe cuțit, care, de îndată ce reducerile de cuțit în bloc, apăsați ușor peria pentru cuțitul taie începutul și să păstreze cuțitul de sus în jos ca un bloc de tăiere. sticlă pură degresat temperatura camerei se introduce în camera și să aducă cu grijă să felie. Datorită diferenței de temperatură din taie cuțitele și se lipește de diapozitiv. Glass, feliile sunt uscate la temperatura camerei sau fixate în diferite fluide în funcție de metoda de prelucrare ulterioară. La tăierea într-un criostat obiecte plutitoare este posibilă prepararea de medicamente, combinate de șase și chiar opt piese. În acest caz, lipirea și de congelare împreună sunt atât de aproape că frontiera este dificil de a discerne chiar și un microscop.
Rețineți că pentru a obține reduceri bune o piesă trebuie să fie răcit într-o anumită condiție. În cazul în care reducerea se prăbușește, obiectul peremorozhen și trebuie să aștepte până când decongelare, nu va primi duritatea corespunzătoare. În cazul în care reducerea este mototolită, obiectul nu este suficient și trebuie să fie răcit ușor să înghețe.

Video: Biochimie, Biologie olimpiada