Sifilisul spirochete - microbiologie cu tehnica testelor microbiologice

spirochetele patogenice
Spre deosebire de bacterii spirochete constituie grup mai puțin răspândită de microorganisme.
Toate spirochetes nu formează spori și capsule. Gram nu sunt vopsite (negativ gram-). Este dificil de cultivat pe medii nutritive. Spirochete - saprofite găsite în corpurile de apă, bogate în deșeuri organice menajere, în nămolul în gură și în intestinul omului. În funcție de caracteristicile sale morfologice spirochete patogene sunt împărțite în trei grupe.

1. Treponema, având forma unei elice regulate. Acestea includ sifilis spirochete.
2. Borrelia, în formă de fire de plisat, cu răsturnări de situație și bucle largi. Acest grup include spirochete febră recidivantă și spirochete Vincent.
3. Leptospira, având numeroase bucle mici și închidere caracteristică în formă de cârlige (Leptospira icter infecțios).

sifilisul spirochete
Agentul cauzal al sifilisului este Treponema pallidum Spirochaeta pallida, descris pentru prima dată Schaudinn F. și E. Hoffmann în 1905, 2 ani înainte de aceasta, experimente pe maimuțe, sifilisul spirochete descoperit DK Zabolotny.
Morfologia și proprietățile tinctoriale. Treponema pallidum este un fir foarte moale, subțire, slab ușor refracting cu mici, uniform, curbe regulate (Fig. 104 și 105 insert).

Fig. 104. Treponema pallidum în câmpul întunecat.
In medie, acest lucru are de la 6 la 14 microni lungime și 0,25 microni grosime. Numele palid a primit din cauza coloranților sărace colorabilității anilină și vizibilitate redusă în stare de viață. Aceste proprietăți se datorează unui conținut scăzut de lipide nucleoproteine ​​și bogăția în spirochetes corpului. Pentru vopsea, utilizați metoda Romanovsky (Fig. 105), sau vopseaua prin expunerea pre-acțiunea unor pete. Cea mai bună metodă pentru detectarea Treponema pallidum este un studiu în câmpul întunecat de vedere. În materialul proaspăt cercetat cu un câmp întunecat ultramicroscope vizual Treponema pallidum prezintă mișcări active, față de axa longitudinală precum și de translație și mișcări de rotație.
Cultivare. Pe comun mediu nutritiv sifilisul spirochete nu rasa. VM Aristovskaya și AA Geltser aplicat cu succes mediu lichid constând din ser de iepure, adăugând la aceasta o bucată de țesut cerebral. Suprafața mediului după însămânțare turnat vaselina. În culturile de grosieră spirochete, mai scurte și diferite polimorfisme. Culturile lipsite de proprietăți patogene și sunt numite „de cultură“ distinct de „țesut“, care rețin agenții patogeni
proprietăți și menținute în laborator la iepuri. pasajul
Rezistența. Treponema pallidum putin rezistent la uscare și temperaturi ridicate. Încălzire la 45-48 ° ucide timp de o oră, la 55 ° -acesta 15 minute. Prin temperatură scăzută este mai puțin sensibilă. La 10 ° este viabilă la câteva zile. Dezinfectanți au un efect devastator. Dintre produsele chimice cel mai dramatic efect are soluție de fenol 1-2%.
Patogenitatea la animale. Mechnikov și Zabolotny a fost primul pentru a obține sifilis experimentale în maimuțe. Iepurii pot fi infectate prin introducerea acestora materiale patologice în cornee, camera anterioară a ochiului, piele, mucoase și t. D. Animalele cu leziunea primară se dezvoltă sub formă de scleroză tipic (sancrul) la locul de inoculare.
Patogenie si sifilis clinice. Singura sursă de infecție este o persoana cu sifilis. Boala poate fi transmisa fie prin contact direct (adesea sexual), sau prin obiecte contaminate cu secrețiile sifilitice. Ustensile de gătit de comun, utilizarea comună lingură și m. P. (contact indirect) poate facilita răspândirea sifilis de uz casnic.
Treponema pallidum intră în corp prin piele rupte și mucoase. După 3-4 săptămâni, pe site-ul de la poarta de intrare există o scleroză-un primar sancrul (ulcer, având marginile dense și, prin urmare, șancrul dno- numele), care caracterizează perioada primară de sifilis.
În viitor, microbul patrunde in organism prin intermediul limfatice si sanguine cai si se extinde pe tot corpul - vine a doua perioadă. Această perioadă este caracterizată prin leziuni ale pielii și mucoaselor, care apar rujeolă, papule, vezicule și pustule - syphilides. A doua perioadă durează de la 2-3 luni la mai mulți ani. Dacă sifilis este tratat insuficient, vine a treia perioadă - gumate. Gummi (granulom) reprezintă grupuri de celule, constând din limfocite, celule plasmatice și epithelioid. Ele pot fi în piele, membranele mucoase, interne
organe, și așa mai departe. d. Gunma cresc uneori vase mari, mici, în jurul lor descrește treptat, în lumen și în cele din urmă închis. În acest sens, puterea gummas celulelor perturbate și are loc adânc distrugerea lor cu formarea de ulcere si cicatrici în toate țesuturile și organele.
In unele cazuri, sifilis intră în a patra perioadă, care se caracterizează prin leziuni ale sistemului nervos central sub forma unei paralizie si tabes dorsalis progresiva. Manifestările clinice ale sifilisului se caracterizează prin faptul că, în cele mai multe cazuri apar leziuni cutanate și mucoase sunt nedureroase, chiar și dispar fără intervenție medicală, recidivă și să dea în cele din urmă leziuni severe la a treia și a patra perioadă.
Imunitatea. Imunitatea innascuta la sifilis la om, nu se observă. Boala decalează nu lasă acest tip de imunitate dobândită, care se caracterizează prin bolile cele mai iifektsionnyh. În infecție secundară sifilis spirochete pacientului nu sunt ucise și depozitate și distribuite pe tot corpul, infectarea organe și țesuturi, împreună cu spirochete conservate infecție primară. Cu toate acestea, atunci când infecția secundară de sifilis primar este forma absentă reacția - sancrul. Această condiție imunologice numită „shankernym imunitate.“
Termenul „imunitate“ in sifilis intelege restructurarea imunologică a organismului, și, prin urmare, natura schimbătoare a modificărilor patologice și tabloul clinic în sine. În ceea ce privește mecanismul acestei „imunitate“, nu este cauzată de factori umorali, deși serul pacienților prezintă anticorpi (lizină, aglutinine).
Diagnosticul de laborator. In prima etapa de sifilis sunt diagnosticate prin examen microscopic în câmpul întunecat sau un material din frotiurilor colorate sancrul.
Pentru a studia necesitatea de a extrage lichidul tisular din părțile mai profunde ale rănii, care conține un număr mai mare de spirochete. În acest scop, la prima suprafata ștearsă cu grijă sancrul tampon steril umezit cu ser fiziologic, apoi o ușoară comprimare a ulcerului este extrudat din cantitatea mică de lichid țesut. În cazul în care acest lucru nu reușește, în partea de jos a ulcerului irita bisturiu ușor poskablivaya sau lingură ascuțite. Lichidul rezultat a fost aspirat cu o pipetă Pasteur.
O picătură de lichid este cel mai bine pentru a explora câmpul întunecat, unde morfologia este în mod clar spirochete luminoase vizibile și mișcările lor caracteristice.
Au loc în spirochetes saprofite genitale și orale (Marteilia-genital Sp, oral - .. Sp microdentium) diferă de spirochete palide în morfologia și natura mișcării lor. Sp. Marteilia are un corp brut cu panza de paianjen mare, acesta nu are nici o mișcare de translație, Sp. microdentium diferite de Treponema pallidum caracterul mișcării lor.
Puteți fi de asemenea preparate cu frotiu de cerneală la Burri (vezi. P. 51), în cazul în care pe un fond negru sunt clar vizibile formă a unui spirochetes alb-cenușie și buclele lor.
Pentru a prepara medicamentul de studiu frotiuri subtiri colorate: plasarea unei picături de lichid pe o lamelă de sticlă, se distribuie pe suprafața celei de a doua margine ferestrei (precum și pregătirea unui frotiu unei picaturi de sânge). Strokes aer uscat, fixate în metanol și colorate timp de 12-15 ore Romanovsky (pagina 52.): Treponema pallidum este vopsit in culoare roz, care permite să se distinge de alte spirochete saprofite, vopsite în culoarea albastră (vezi fig .. 105).

Fig. 105. Treponema pallidum în evacuarea șancrului. Colorat Romanovsky.

Datorită faptului că antigenele pot avea diferite proprietăți anticomplementare înainte de dirijarea Wasserman complementului titrate nu numai în formă pură, ci și în prezența antigenelor. Deoarece Wasserman pune cu 3 antigene, este necesar să se titra complementului cu fiecare antigen separat.
Reacții de modificare Vassermana- reacție Grigoriev-Rapoport (Tabel. 25). Această reacție se bazează pe activitatea complementară a serului de testare. Reacția este folosită (nu mai târziu de 36 de ore după cules) serul pacientului activ (neîncălzită). Pentru a realiza reacția antigenele necesare și defibrinat nespălat ser hemolitic, se filtrează prin două straturi de sânge cheesecloth oi.

Schema de reacție Grigoriev - Rapoport

În absența hemolizei ca răspuns ser de control a produs în mod repetat și la 0,2 ml de ser cu 0,2 ml ser negativ cunoscute dabavlyaet active și, prin urmare, cantitatea de soluție salină adăugată este redusă în mod corespunzător.
Rezultatele testului sunt luate în considerare imediat după terminarea reacției bazată pe mărturia primelor două tuburi conținând antigenul. Un rezultat pozitiv este caracterizat printr-un total negativ întârziere hemoliza - hemoliză completă. Serul de control (al treilea tub fără antigen) ar trebui să fie o hemoliză completă.

Pe lângă aceste reacții, pentru serodiagnosis de sifilis utilizat pe scară largă reacție sedimentară, a cărei esență constă în reacția ser inactivat pacient cu antigen, prin care un precipitat în tub. Dintre aceste reacții și Kana-Sachs Vitebsk au cea mai mare cerere.
canal de reacție. Pentru setarea reacție Kahn următoarele ingrediente sunt necesare: 1) inactivat din sânge ser uman al pacientului, 2) antigen special Kahn și 3) soluție salină.
antigen Kahn este un extract de lipide din mușchii inimii de oaie, la care se adaugă colesterolul. Înainte de experiment, în funcție de titrul, antigenul marcat diluat după cum urmează. Într-un flacon curat, uscat turnat antigen, iar celălalt - cu ser fiziologic, în cantitatea indicată pe etichetă (1- 1,1- 1,2). Apoi, soluția salină din al doilea tub turnat rapid în primul conținând antigenul (și nu invers). Amestecul rezultat a fost agitat prin turnare din tub în tub de 6-8 ori, și se lasă să stea timp de 10 minute la temperatura camerei pentru maturare.
experiența de așteptare. Statul stabilește șase eprubete aglutinare. Primele trei tuburi de testare (1, 2 si 3) sunt cu experiență, în următorii trei (4, 5 și 6) -kontrolnymi (antigen de control). Singur antigen după coacere contribuie micropipete 3 tuburi experimentale și 3 de control. antigen micropipete trebuie coborâtă la fundul tubului uscat, fără a atinge precizia de măsurare stenok- realizat prin acest antigen. În eprubetă 1 se toarnă 0,5 ml, 2 - 0,025 și 3 - 0,0125 ml antigena- aceeași cantitate de antigen este inlaturata respectiv în trei tuburi de control. În timpul tuturor eprubete formate din 0,15 ml de ser în aceeași cantitate kontrolnye- de ser fiziologic. Tuburi trepied 3 minute agitat puternic la agitare sa produs din ser cu antigenul și pus într-un termostat la 37 ° timp de 10 minute. După scoaterea din cuptor, adăugat la primul proces și tubul primul control, 1 ml de ser fiziologic, al doilea și al treilea pilot, flacoanele de control 0,5 ml de soluție salină. Tuburile sunt din nou agitate și ia în considerare rezultatele reacțiilor (schema de reacție Kahn este prezentat în Tabelul. 26).
Notă. Cu orice număr de control al antigenului ser investigat pus unul. În cazurile pozitive, reacția este pus ser de control. În acest scop, este turnat într-un tub de testare într-o cantitate de 0,1 ml, s-a adăugat 0,3 ml de ser fiziologic și se agită timp de trei minute.
Contabilizarea reacția producând ochiul liber sau cu un seroscopy lupei.
Tabelul 26
Schema de reacție Kana

Atunci când se iau în considerare reacția cu ochiul liber, fiecare tub este scos din trepied și ușor îndoit, care deține puțin peste nivelul ochilor în fața sursei de lumină. Floculare (precipitat) în tuburi cu o indicație de reacție pozitivă, serul este notat cu Kahn și avantaje. Foarte reacție pozitivă este indicată de patru plusuri (+ + +) - este caracterizată prin pierderea de fulgi clar vizibile în toate tuburile și lichid ușor opalescente. O reacție pozitivă este indicată de trei plusuri (+ + +) și se caracterizează prin cel puțin un floculare distinct în toate tuburile. Pentru slab reacție pozitivă este notat cu două plusuri (+), caracterizate printr-o formațiune mai slabă a nămolului și prezența particulelor fine în lichid tulbure. Formarea de particule foarte mici, suspendate într-un lichid turbiditate denota un plus (+). Absența nămolului și fără particule în suspensie într-un lichid este o măsură negativă NEGA-reacție și este notat un minus (-). Tuburile de testare trebuie să fie respectate fulgi.
TSITOHOLEVAYA REACȚIA sedimentar (Tabel. 27) Sachs-Vitebsk. Pentru această reacție trebuie să fi inactivat de ser de testat și antigenul tsitoholevy Sachs-Vitebsk, care extrage lipide din mușchii inimii bovine, la care se adaugă colesterolul.
Tabelul 27
Schema de reacție tsitoholevoy Sachs - Vitebsk

Se agită energic timp de 1 minut și se lasă la temperatura camerei timp de 30 de minute
Saline I 0,5 I 0,5 I 0,5
La pierderea de cristale de colesterol din antigenul trebuie încălzit într-o baie de apă la o temperatură de 55-56 ° sau într-un cuptor. Setați pe flacon titrului antigen. Antigenul este diluat cu soluție salină în conformitate cu acest titru, se pipetează 1 ml de antigen rapid adăugat la 2 ml de soluție salină, se amestecă bine aceeași pipetă și lăsat timp de 10 minute la temperatura camerei pentru maturare.
Experimentele au fost efectuate în trei eprubete aglutinare. Primul tub de 0,1 ml de syrorotki contorizat investigate și adăugat 0,05 ml de antigen diluat la al doilea se toarnă 0,05 ml de antigen diluat și 0,1 ml de soluție salină și un al treilea probirku- 0,1 ml de ser și 0,05 ml alcool etilic. Toate tuburile au fost centrifugate timp de un minut și se lasă să stea timp de 30 minute la temperatura camerei. La fiecare dintre acestea s-a adăugat 0,5 ml
soluție salină, se agită din nou și să ia în considerare rezultatele. controlul antigenului pus într-un tub de testare pentru întreaga experiență. Reacțiile de contabilitate Sachs Vitebsk produc același mod ca și reacția Kahn.
Reacția imobilizare pal treponemes. Precum și utilizat în prezent pentru diagnosticul de sifilis reacție imobilizeze treponemes, esența care! Este abilitatea sângelui serul pacientului sifilis pentru a opri mișcarea spirochete. Antigen pentru această reacție sunt treponema vii derivate din țesutul testicular iepure infectat. Antigenul este considerat adecvat în cazul în microscopie relevă un număr mare de treponemes mobile. Cu trei săptămâni înainte de reacția de setare pacientul nu trebuie sa primeasca antibiotice sau alte medicamente antisyphyllitic. Această reacție este mai specific și sensibil decât reacția Wasserman și Sedimentarul.

Chimioterapia. Pentru tratamentul sifilisului medicamente utilizate cu succes mercur, bismut, arsenic (Salvarsan, novarsenol, miarsenol) și penicilină.