Leptospira - microbiologie cu tehnica testelor microbiologice

Leptospira sunt agenții cauzatori ai bolilor infecțioase acute - leptospiroza, care infectează omul, rozătoarele, vite, oi, porci, câini și alte animale.
Pentru prima dată patogen Leptospira au fost descoperite în 1914 de către cercetătorii japonezi Inada și Ido, care le-a izolat de la organele de cobai contaminate cu sângele pacienților cu icter infecțios. Aceste spirochete au fost numiți de ei icterohaemorrhagiae Spirochaeta.
In 1928, SA Tarasov izolat febra apa patogen Leptospira grippotyphosa. Acest nume a fost dat din cauza Leptospira unele asemănări clinice febră apă cu gripa, și parțial cu boala tifoidă.
Două forme de leptospiroza: infecțioase sau boală Weyl Vasileva icter - leptospiroza (leptospiroza icterica patogen L. icterohaemorrhagiae) și anicteric (febră apoasă, cosit, febră Far și colab.), Care sunt cauzate de diverse Leptospira L. grippotyphosa, L. batavia , L. canicola, L. DBA și colab.
Morfologia și proprietățile tinctoriale. Conform proprietăților morfologice și culturale toate Leptospira similare. Leptospira sunt caracterizate prin numeroase bucle extrem de mici. Lungimea Leptospira sunt 6-9 microni și o grosime de 0,25 microni. În centrul ei sunt oarecum mai groase și întinse spre capete. Recente end cărbunăreasă îngroșat (fig. 108). Leptospira posedă o mobilitate activă. Acestea conțin în corpul lor este foarte mică și, prin urmare, dificil de nucleoproteine ​​pictat (Romanovsky roz atunci când serebrenii- în maro sau negru). Mai mult decât atât, aceste metode de colorare, astfel modifica structura Leptospira care le recunosc devine extrem de dificilă. Prin urmare, cercetarea în domeniul de vedere al tempo (în stare vie) metoda este folosita pentru a le detecta.
Cultivare. Cultura Leptospira a fost obținut cu ușurință pe medii care conțin o cantitate minimă de proteină.

Fig. 108. Leptospirele icter infecțios (cultură pură).

Următoarele mediile de cultură utilizate pentru cultivarea Leptospira:

1. Soluție peptonă în apă de la robinet (1: 1000) cu câteva picături de acid metafosforic.
2. mediu Ulenguta constând din apă sterilă de la robinet cu ser de iepure 10%, este încălzit la 56-58 ° timp de 30 minute.
3. Fosfat-ser mediu TERSKIKH - un amestec de 10 ml soluție Vi5 M de Na2HP04 și Vis soluție M KH2P04 cu 90 ml de apă distilată: Amestecul se sterilizează și se adaugă cu 10% ser de iepure de căldură.

Miercuri după însămânțare acoperit cu un strat de parafină lichidă sau ulei de parafină. Primele zile de semănat se recomandă să se păstreze la o temperatură de 32 °, în următoarele câteva zile - la 25-28 °. creșterea Leptospira începe în ziua de 5 sau mai târziu. Leptospira nu cauzează turbiditatea bulion. Prezența Leptospira este determinată prin examinarea microscopică în câmp întunecat de vedere.
Rezistența. Încălzire ucide spirochete în apă timp de 30 minute la 50-55 °.

leptospiroza anicteric - febra apa apare mai benigne, fără efecte de icter și sângerare. 4-7 zile de boală în zona claviculei apare uneori erupții cutanate polimorfă care se extinde treptat la trunchi și extremități. După 2-3 zile, erupția dispare. Temperatura este menținută timp de aproximativ o săptămână. Rezultatul obișnuit al bolii - de recuperare.
Imunitatea. Boala recurente sunt rare. În sângele pacienților arată leptospiroliziny și aglutinele.
Diagnosticul microbiologic. Material pentru studii de laborator este sângele pacientului în primele zile de boală, în prezența unei temperaturi ridicate, urina 10 - 12-a zi, când fenomenele meningeale lichidul cefalorahidian, potrivit epidemiologice de apă indicații, alimente, materiale putredă (cadavre de oameni și animale leptospiroza) .
Folosit: 1) Metoda de investigare microscopică, 2) materiale de cultură pe un mediu de cultură, 3) metode de investigare serologice și 4) o probă biologică.
Pentru microscopice de sange studiu amplificarea acesteia (2-3 ml) din vena în seringă cu 4 ml de soluție de citrat de sodiu 1,5%. Amestecul a fost turnat într-un tub de testare, centrifugat, precipitatul se separă. Urina si lichidul spinal pot fi investigate fără nici un tratament sau după centrifugarea timp de câteva ore, la 4000 rot / min. După centrifugare, lichidul este turnat și peleta examinate. O picătură din materialul testat este aplicat diapozitivele subțiri (nu mai groasă de 1 mm) și acoperite cu un capac de sticlă (nu mai groasă de 0,2 mm). Medicamentul rezultat „zdrobit“ picături luate în considerare în câmpul întunecat. Preparatul va fi vizibil subțire Leptospira mobil alb-argintiu.

Deoarece studiul microscopic ofera un mic procent de rezultate pozitive, este necesar să se aloce o cultură pură de Leptospira. sângele unui pacient luat dintr-o venă (5 ml) a fost inoculată în 3 tuburi (2 ml, 1 și 0,2 ml) la un mediu fără ser. Sângele însuși conține suficiente elemente nutritive pentru creșterea Leptospira. Urina si lichidul cefalorahidian sunt însămânțate la 0,5-1 ml în 3-4 eprubete conținând mediu ser de iepure. De la un cadavru uman sau animal să ia bucăți mici de rinichi, splină, ficat, creier, măcinat într-un mojar cu 2,3 ​​ml de soluție salină. Toate acestea este de a face este steril. Suspensia rezultată a fost turnată în tuburi, stabilit 1 oră. Mikroskopiruyut supernatant topsheet și apoi inoculat cu 1 ml de mediu nutritiv în tuburi 3-4. Culturile puse într-un termostat și la fiecare 5 zile (timp de 3 luni) dintre ele, preparate pentru microscopie cu câmp întunecat.
La semănat materialul contaminat (urina sediment, apă și t. D.), Împreună cu reproducerea Leptospira observat o creștere microflora străine. În aceste cazuri, pentru a obține o cultură pură de Leptospira 3-4 ml din materialul de testat se administrează intraperitoneal cobai. După 10-15 minute, ea a sângerat din inimă și răspândirea pe un mediu de cultură fără ser.
Când pacientului culturi de sânge în 80% din cazuri, există un rezultat pozitiv.
Diagnosticul serologic al leptospirozei se bazează pe detectarea aglutinele și complement lizină anticorpi în serul pacienților (din a 2-a săptămână de boală). Aglutinarea - liză este formulată după cum urmează. Ser diluat la 1: 50 până la 1: 10 000 și se toarnă în 0,2 ml (patru picături) în mici tuburi de test de aglutinare stabilite într-o multitudine de rânduri (numărul de serotipuri de Leptospira, care este pus reacție). La toate tuburile din fiecare rând, se adaugă o cantitate egală de o cultură vie de tip specific Leptospira L. ictefohaemorrhagiae, L. Kazan., L. Weil- L. canicola, L. batavia, L. grippotyphosa, L. DBA, L. kasachstanica I și colab.
Tuburile de control în loc de ser este turnată în 0,2 ml soluție salină și 0,2 ml culturi de Leptospira. Tuburile au fost agitate și puse pe o 2 ore într-un termostat la o temperatură de 25-30 °. Din fiecare medicament tub pregătit „strivite“ și o scădere în domeniul ratei mikroskopiruyut.

Fig. 109. aglutinare și liza Leptospira.
1 - control- 2 - aglutinare leptospir- 3 - începutul lizei - grăunțos
degradare.
dizolvarea completă a Leptospira, liza parțială sau umflarea granulară: In prezenta anticorpilor serici în primele diluții liză observate. Diluțiile ulterioare găsi agglyutinatsiyu- acumularea de Leptospira ca "antene" (Fig. 109). Valoarea de diagnostic are o reacție pozitivă la o diluție a serului de 1: 400.
La formularea complementul pacienții fixare ser diluat 1: 10, 1: 100. Antigenul este cultura Leptospira sau autolizat.
La 3 ml dintr-o probă biologică de sânge al pacientului în perioada de febra 5-10 ml de urină sau lichid cefalo-rahidian, 1 ml de organe de suspensie ale cadavrelor umane sau de animale cobai a fost administrat intraperitoneal. Imagine a bolii și rezultatele autopsiei de cobai decedat sunt descrise mai sus.
Tratamentul și prevenirea. Tratamentul leptospyrozov se efectuează cu penicilină. Se recomandă să se folosească de cal sau convalescent ser Leptospira ser imunizat.
Măsuri preventive de natură generală includ: reabilitarea zonelor icter infecțios endemică, crește aciditatea solului și razatoare. Profilaxia specifică este de a utiliza un vaccin care conține un Leptospira omorât termic 3 tipuri (ikterogemorragiya, gripa-tifozi și Monakova).