Difterie - microbiologie cu tehnica testelor microbiologice

Mai întâi difteria bacillus Corynebacterium diphtheriae) a fost descrisă de E. Klebs în 1883, și F. Leffler - 1884
Morfologia și proprietățile tinctoriale. Bacteriile diferă polimorfism pronunțată. De obicei, ei au o lungime de 3-4 microni și 0,3-0,5 microni în grosime (fig. 83 și 84).

Fig. 84. Frotiul filmului difterie. Acoperirea albastru de metilen (procedeu într-o etapă).
Fig. 83. diphtheritic cultură rod Pictură de Neisseria.

Fig. 85. Coloniile de bacili difterie pe telluritovoy
mediu.
și - de tip colonie gravis- b - colonii de tip mitis.

Cel mai bun teren propice pentru cultivarea bacteriilor difteriei este pliată cal sau ser bovin. Pe acest mediu, coloniile bacili difteria pot fi detectate prin 8.10.14 ore. Coloniile formă circulară, convexă, oarecum crescute la centru, cu un diametru de 1 mm. Suprafața coloniei este netedă sau ușor granulată, de culoare crem. La periferia coloniei sunt mai transparente decât în ​​centru. Cultura crește pe măsură ce nu fuzioneze cu fiecare alte colonii, care îi conferă o formă ușor nodulară (shagreen).
Tipuri de bacterii difterie. Pe baza proprietăților culturale și biochimice ale celor trei tipuri de tije difterie: gravis, mitis, intermedius. Cu tipul de diferențele asociate agentului patogen în tabloul clinic al bolii. A considerat că stick-uri de tip difterie Gravis apar în cazurile severe, toxice. Ele formează pe mediu telluritovoy (agar cu sânge și telurit de potasiu) serovatochernye relativ mari sau plate colonii negre, aspre cu ischerchennostyo radial și margine zimțată (Fig. 85) pentru bulion da un precipitat granular și film amidon descompus și glicogen, hemoliza nu este cauzata . Bastoane de tip mitis observat în cazurile în care frecvente efecte toxice sunt ușoare, cu toate că filmele amigdalele pot fi destul de mare. Ele formează în coloniile convexe netede-telur agar mici lucioase
negru, cu o margine netedă, se amestecă uniform bulion, amidon și glicogen nu sunt descompuse, gemolitichny. tip intermedius ocupă o poziție intermediară între gravis și mitis. Type bacterii intermedius cresc prost și formează colonie neagră mică plat cu o bordură transparentă pe margine. Miercuri Tyndall (cistină-Telurit - mediu fără ser) bacilli Colony difterie sunt înconjurate de un halou de culoare maro închis. În prezent, cu toate acestea, ea a stabilit că evoluția clinică a bolii depinde adesea de bacilul de tip difterie. Toate tipurile de bacilul difteric descompuse de glucoză, maltoză, galactoză, pentru a forma acidul, nici gazarea. Lactoză, zaharoză, manitol, și ele nu se descompun.
Difteroidele și bacterii lozhnodifteriynye. Intitulat „difteroidele“ coli condițional combinate, difteric morfologic similare, dar care nu au proprietăți toxice. Ele se găsesc pe piele și membranele mucoase ale oamenilor sănătoși. Acest grup include Corynebacterium xeroza, Corynebacterium acnee și colab.
Pe gura membranei mucoase, nas, nazofaringe apare lozhnodifteriynaya coli - Corynebacterium Hoffmani.
dificultăți speciale în diferențierea acestora de la bacilii difterie experimentat microbiolog tehnician nu se simte. De exemplu, bagheta Hoffmann mai scurt și mai gros, nu are nici un polimorfism localizat în perechi sau palisadă nu are nici o volutin cereale. xeroza Corynebacterium, spre deosebire de bacilul difteric are mai multe boabe volutin. Alte difteroidele dimensiune mai mică difterie bacillus, nu au polimorfismul, sunt dispuse una față de alta la un unghi sau palisadă nu are boabe volutin sau un singur bob la un pol al celulei.
În cazurile îndoielnice, este necesar să se recurgă la studiul activității biochimice a culturilor izolate și toxicitatea se.
mediu teluric. 1. hemato-agar teluric. La 100 ml de topit și răcit la 50 ° 2% agar carne-peptonă (pH 7,6) a fost adăugat 5-10% sânge uman sau animal defibrinat și 1 ml de soluție 2% de telurit de potasiu (KgTe04). Mediul este bine amestecate și turnat în ceașcă. In acest mediu, a redus difterie telurit de potasiu pentru a bacteriei telur metalic.
On-Telurit agar cu sânge de bacterii coccal grup cresc lent. colonii Aureus până la sfârșitul 2 zile devin mari gri sau negru, cu o tentă maronie. Colonii Hoffmann Coli până la sfârșitul prima zi de creștere - netede, lipicioasă cu centrul negru și gri, la periferie, în a 2-a zi de întreaga suprafață a coloniei devine negru.

1. miercuri Clauberg. 100 ml de 3% agar nutritiv (sau 7,5 g de agar nutritiv uscat la 100 ml apă distilată) a fost topită, se adaugă 3 ml dintr-o soluție 2% de telurit de potasiu 10 ml de glicerină și 50 ml dintr-un amestec de sânge lac. Rapid totul se amestecă și se toarnă în ceașcă. Mediu este clar, culoarea vinului roșu.

de sânge lăcuit preparat după cum urmează: la 34 ml apă (sterilă) distilată, se adaugă 16 ml de sânge de bovine defibrinat sau sânge uscat sau instrucțiuni diluate uman respectiv.
Prepararea unui amestec de glicerol: la 40 ml de sânge de bovină defibrinat sau sânge uman sau diluat se adaugă uscat 20 ml de glicerol steril chimic pură. Amestecul a fost recomandat să stea în frigider timp de 3-6 săptămâni. In acest mediu, difteria bacilul, sare de regenerare telur crește în formă de colonii opace rotunde cu un centru de negru sau gri închis. Lozhnodifteriynye bețișoare opace formează colonii mici de gri cu centru maro. Difteroidele cresc sub formă de colonii gri strălucitor convexe, cu un centru de negru.

1. Tyndall mediu Cistina-Telurit-ser (Modificat conform instrucțiunilor). secvențial la 100 ml 2% din ° agar-agar nutritiv topit și răcit la 60 se adaugă: 1) soluție 1% de cistină în soluție 0,1 N H2S04 (sau CI1) - 12 ml-cistină trebuie să fie dizolvat în acid sulfuric sau clorhidric, încălzirea pe o baie de apă la o temperatură de 80-85 °, 2) 0,1N. Soluție NaOH 12 ml, și 3) soluție telurit 2% potasiu 1,8 ml, 4), soluție hiposulfit de sodiu 2,5%, 1,8 ml, 5) normal de cal sau ser bovin - 20 ml. Mediul este agitat și se toarnă în steril Petri strat de 4-5 ml.
2. Indicatorul hinozolnaya Dry miercuri perpetrarea B (conform instrucțiunilor). La 100 ml de apă rece se adaugă 8,7 g de mediu pulbere hipozolnoy uscată, bine amestecate și încălzite la foc mic până la topirea completă a agar. Mediul se fierbe timp de 2-3 minute, nepermițând stick-agar, pentru a forma krupnopuzyrchatoy spumă sedimentare rapidă.

La răcit la 50 ° mediu adăugat 5 ml (preferabil 10-15 ml) de sânge steril, se agită și se toarnă în ceașcă.
După solidificare mediu ușor uscat într-un cuptor și se „poate fi utilizat în decurs de 3-4 zile, atunci când este păstrat între 4 și 10. mediu Pregatite are o culoare albastră. bacilii Coloniile difterie cresc în 24-48 de ore, iar indicatorul este redus, iar mediul devine purpuriu, în locul creșterii bacililor difterie. bacilii Coloniile difterice sunt colorate albastru.
Rezistența. Temperatura de 60 ° difteriei bacillus ucide în 10 minute. Pentru a lumina directă a soarelui și de lumină ambientală stick de difterie sensibile.
Prin uscare este relativ stabilă. Soluție de acid carbolic 5% ucide timp de 1 minut.
toxină difterică și patogenitatea la animale.
Alocă bacil exotoxina difterie, a cărui toxicitate poate fi atât de mare încât 0.002 de cobai ml subcutanat provoacă moartea animalului după 3-5 zile. toxina difterica este extrem de fragilă: este distrusă prin încălzire la 60 ° și brusc atenuat prin acțiunea luminii și oxigenului atmosferic. Sub influența acțiunii simultane a formol (0,3-0,4%) și o temperatură de 40 ° timp de 1 lună poate fi obținută - toxoid. Toxoid este utilizat pentru imunizarea activă împotriva difteriei și a persoanelor în fabricarea de seruri terapeutice.
Spre deosebire de toxina toxoid birouri suficiente: sub influența acțiunii luminii pe depozitarea pe termen lung și puterea antigenice nu este schimbat.
Cel mai bun mediu pentru exotoxină este bulion vatra (vezi. P. 67). Rezistența toxina este determinată de cea mai mică doză letală - .. Dim, adică, cel puțin cantitatea de toxină care omoară cobaiul subcutanate cântărind 250 g, la 4 sau a 5-a zi. Animalele nu pot obține o boală similară cu difterie uman. Cu toate acestea, în unele animale, în special la cobai, după ce a fost infectat la dezvoltarea unui număr de modificări patologice foarte caracteristice. Ca rezultat al injectării subcutanate a culturilor difteriei sau animal moare de toxina difterica, în zilele următoare. La necropsie la locul de injectare se produce infiltratului seros sau serosanguineous. Glandele suprarenale sunt mărite și hyperemic brusc. In cavitatea pleurală, pericard și cavitatea peritoneală se observă acumularea de lichid seros.
Când administrarea intradermică de toxină difterică sau cultură există anumite leziuni necrotice locale ale pielii.
Patogenie si difterie clinice. Sursa de infecție în difterie este un om bolnav, care, după alocarea - mucus, puroi, saliva, bacteriile spută se disipează în spațiul înconjurător, mediul și obiecte. Cel mai adesea, infecția se produce prin kapelnoaerogennym. Pericolul este, de asemenea, convalescenți și bacillicarriers sănătoase. difterie
stick-uri pot fi stocate pentru o lungă perioadă de timp în gât de oameni care au avut difterie. Bacteriocarrier în difterie este de o mare importanță epidemiologică: face sistemul imunitar și, în același timp, contribuie la răspândirea infecției.
Difteria se transmite prin tuse, strănut și vorbind de purtători de bacterii, precum și indirect - printr-o varietate de articole care au fost în uz persoanei bolnave (lenjerie de corp, lenjerie de pat, jucării, cărți, feluri de mâncare). traseu alimentar de infecție (prin lapte și înghețată), un fenomen rar.
Patogeneza difterie crucială exotoxină intoxicatie difterie. Difteria se manifestă sub forma unor leziuni primare ale membranelor mucoase ale amigdalelor, perdele palatine, nasului, gâtului și nasului, unde procesul se poate răspândi mai adânc în tractul respirator, care afectează laringe și bronhii. Uneori, există, de asemenea, un ochi difterie, suprafețele plăgilor, urechea și vagin. La locul introducerii de microbi apar peliculă gri, sudate să fie tkanyu- când scoaterea lor suprafață sângerare vizibile.
bețișoare Reproducerea difteria apare numai la punctul de punere în aplicare, și în sânge, acestea nu sunt, în general, vândute. În locul înmulțirii bacteriilor produc difterie exotoxină, care este îmbibată, dă o intoxicație generală a organismului.
Perioada de incubație difteria 2-7 zile. Boala începe o creștere a temperaturii, dureri în gât la înghițire și indispoziție. Toxin afectează mușchiul inimii (puls mic și rapid, tonuri înăbușite). Tensiunea arterială este scăzută datorită distrugerii glandelor suprarenale. În viitor, în cazurile severe de difterie apare cianoză, extremități reci, iar moartea survine de insuficiență cardiacă acută.
Difterie a laringelui, sau adevărat crupa, caracterizat printr-o tuse seaca uscată, îngustarea lumenului laringelui, anoxie, se termină în moarte. complicații toxice cu difterie sunt palatului moale paralizie, membrelor și diverse myshts- deosebit de periculoase paralizia mușchiului cardiac.
Alături de plămâni întâlnit grele, forme atipice de difterie, care au loc sub masca diferitelor
inflamație a amigdalelor. Astfel de cazuri sunt dificil de detectat și, prin urmare, foarte periculoase din punct de vedere epidemiologice.
Imunitatea. Imunitatea în antitoxică difterie. Ea se bazează pe prezența anticorpilor serici - antitoxine. Copiii alăptați, de obicei, nu se imbolnavesc cu difterie, datorită imunității lor existente pasive, pe care le primesc de la mama prin placentar și parțial cu lapte. antitoxine Ulterior se acumulează ca rezultat al imunizării active și contactul naturale cu bacilul difteric nativ.

Diagnosticul microbiologic. În difterie, următoarele tipuri de cercetare de laborator: bacterioscopice, bacteriologice, experimental. Materialul pentru studiu sunt secreții ale membranelor mucoase, filme și epidemiologilor la cerere infectate - lapte, înghețată, spălături de la diverse obiecte Ia un material tampon steril, constând dintr-o bucată de vată, înfășurată pe un capăt al unui băț de lemn sau tijă metalică (jucării, etc.). În prezența filmelor difterice brusc definite ar trebui să frecați zona afectată cu un tampon pentru a obține o anumită cantitate de exudat. Material preluat din nas în același tampon, dar unele număr minim de lână înfășurat pe ea. Pentru a capta materialul, este necesar să se treacă primul tampon pasajul nazal. Atunci când se iau materialul din
NOCA necesare pentru a face nările toaleta (se spală cu soluție salină sau alcool) și nu atingeți pielea nasului.
material prelevată este plasat în eprubete și imediat trimise la laborator. Dacă livrarea durează mai mult de 3-4 ore, folosind tampoane umezite cu o soluție de 5% glicerol în 0,85% soluție salină. Tampoanele trebuie să fie protejate de acțiunea soarelui, congelare și uscare. Cea mai mare parte inoculare (2-50%), difterie bacili de la pacienți difterie este cauzat cel mai adesea prin luarea materialului greșit, iar durata de timp de la momentul luării sale în sus de însămânțare.
In laborator, se procedează la examenul bacteriologic. Tampoanele sunt introduse în tubul din ser de cal pliat și apoi prin frecarea suprafeței conținutului în ser, în timp ce produce mișcarea de rotație. În același timp, face cultură pe o ceașcă de agar cu sânge telluritovym, miercuri sau miercuri Clauberg Tinsdalya pentru a obține culturi pure de bacili difteria. Pentru scopuri de diagnostic, conținutul de studiu microscopic direct pe tamponul se desfășoară în prezent o rară, dar, uneori, în cazuri de urgență, la solicitarea unui medic care aplică acest lucru este justificat. Apoi, după ce materialul de plantare face frotiuri pentru colorarea albastră și Neisseria.
Material însămânțat crescute la 37 ° C și se examinează 18-24 ore mai târziu. Acesta poate fi folosit pentru a efectua un studiu, de exemplu, 6-12 ore în caz de urgență. A crescut de cultură preparate frotiurilor și colorate Gram, metilen alcalină albastru și Neisser și mikroskopiruyut. Uneori a întârziat dezvoltarea microbilor. În aceste cazuri, este necesar să părăsească cultura pentru o altă zi, si repeta examenul microscopic. Prezența microorganismelor cu difterie morfologice caracteristice și proprietățile tinctoriale, pot fi considerate ca un rezultat pozitiv.
O metodă care permite selectarea difterie bacillus mai rapid este că tamponul preumezite ser steril, care se rostogolesc pe tamponul prin încălzire la 80 °. tampon Ser sters zona afectata (faringe, amigdale) și plasate într-un termostat la 37 °.

Video: Watch Video biomaterialului gard - dnks.ru

bacilii Proprietăți difterie și aproape de ea difteroizi

Frotiuri preparată din cultura de 3-4 ore în tampon, este posibilă detectarea unui număr semnificativ de bacterii.
Se obțin rezultate bune prin luarea materialului nu tampon uscat, un tampon îmbibat cu, înainte de utilizare Telurit 2% potasiu. Acest lucru oferă în mod constant o mare inoculare de bacili de difterie. Atunci când se utilizează telluritovym tampon de creștere difterie bacili în mediul Leffler apare nu mai târziu de 18-24 de ore.
Atunci când se identifică o cultură pură de bacilul difteric și diferența de la bastoane psevdodifteriynoy Hoffmann și difteroizi determinate următoarele proprietăți de bază (Tabelul. 20).
La alocarea culturii nontoxigenic fără zaharuri fermentabile da probe suplimentare pentru detectarea enzimei ureazei (uree divizare) și tsistinazy (sonda Pisa).
Pentru a determina ureazei enzima (proba Zaks) bulion de cultură extrasă a fost inoculată într-o uree și un krezolrotom indicator. mediu Roșeață observate în 20 minute indică prezența enzimei ureazei, care nu este caracteristic bețișoare difterie adevărate. Prezența enzimei tsistinazy detectată de însămânțare într-o coloană de mediu de cultură cu cistina și acetat de plumb, este obligatorie pentru bețișoare difteria. Sub acțiunea tsistinazy cistina și scindată prin reacția cu acetat de plumb, forme sulfură de plumb, care colorează mediul în timpul injectării în culoarea neagră-maronie.
Pentru finale bețișoarele diferențierea difterice de alți membri ai grupului corineformă introdus testul de aglutinare microscopic pe o lamelă de sticlă cu o difterie ser polivalenta urmează: ser aglutinant diluat cu ser fiziologic în raport de 1: 25. Soluția salină se prepară după cum urmează. La 100 g de apă distilată se dizolvă 3 g de clorură de sodiu, ajustat la pH 7,6, adăugând soluție 5% Na2HP04 și sterilizat prin care curge abur în trei exemplare. Cultura izolată este spălată cu aceeași soluție salină, o pipetă Pasteur sterilă și aplicată o picătură de ser polivalenți. Controlul este aglutinarea ser și soluție salină. Atunci când un răspuns pozitiv în decurs de 2-3 minute aglutineze apar fulgi.
reacția Aglutinarea pot fi livrate cu I, II, III, IV și VI serotipuri seruri difterie standard de.
În cazul în care cultura selectată este destul de tipic, apoi să-l distinge de difteroizi toxigenicitate definesc această cultură prin infectarea animalelor. Identificati toxigenicitatea cultura dedicat bacilului difteric este necesară și în cazurile în care acest microb izolate de la purtători sănătoși și convalescenți sau din locuri, cum ar fi suprafața plăgii, organele genitale, urechi, ochi, etc. viruși infecta cobaii în două moduri - .. intradermică și subcutanată . În experiența de a lua doi porci, dintre care unul (control) a fost administrat cu o zi înainte de ser difterie antitoxică într-o cantitate de 500-1000 AE-un alt porc ser (experimental) nu a fost administrat. In ziua experimentului ambii porci au fost administrate o cultură test într-o cantitate de 0,2 ml la standardul 50-100-200 milioane. Microb în 1 ml. Odată cu introducerea culturii de zi cu zi sub piele a unui cobai a dezvoltat următoarele fenomene. La locul de administrare în câteva ore testovatoy consistență infiltratul, care până la sfârșitul anului de 1-bit sau 2 zile ajunge la dimensiuni destul de considerabile. Animalul devine letargic, slab și refuză să mănânce. Moartea se produce prin diferite perioade (1-5 zile sau mai mult), în funcție de cultura și toxicitatea se dozei. La deschiderea administrației la fața locului este de infiltrare seros sau serosanguineous, în care se găsesc sânge și organe destul de numeroase julituri difterie bakterii- rămân sterile. Postmortem de la alte caracteristici fenomene de creștere și de cele mai hiperemie suprarenale și exsudat seros în cavitatea pleurală și în pericard. Organele sunt zone necrotice străbătute de leucocite, musculare si tesut nervos - modificări degenerative. Când intradermică la locul culturii este o reacție inflamatorie și necroză. În controlul porcii nu au observat nici o reacție la ambele metode de administrare a culturii. Metoda Vnutrikozhiy permite un porc pentru a testa mai multe tulpini de bacili difterie.
bacilii toxigenicitate difteric poate fi determinată într-o altă, metodă mai simplă. Capsula Petri Geidenreich turnată în 12 ml de topit și răcit la 50 ° 2% agar carne-peptonă sau 2% bulion agar vatră, la care se adaugă 0,3 mg de cistină și 15-30% ser de cal normal. Se amestecă bine și se lasă să se solidifice agar. Apoi, în mijlocul paharului este plasată o bandă de hârtie de filtru și sterilizate într-o autoclavă umezit ser antitoxic difteriei care conține în 1 ml 500 AE. Vasul a fost uscat într-un cuptor timp de 15-20 minute, apoi inoculate cu cultura sub accident vascular cerebral de studiu perpendicular pe un filtru de hârtie sau plachete cu un diametru de 1 cm, la o distanță de 0,5 cm de hârtie. O ceașcă poate semăna 3-4 cultură (un control - toxigenic).

Fig. 86. Precipitatul Educație - floculare ( „Boom - mustață“), ca rezultat al interacțiunii toxina difterica, bacili difteria cu ser antitoxic.
Însămânțarea fiecărei culturi produc plachete sau patru linii (două pe fiecare parte).
Culturile sunt plasate într-un incubator. Contabilitate produc 24, 48 și 72 ore.
Determinarea toxigenicitatea bazat pe următorul principiu: toxina produsă în procesul de creștere a bacilului difteric, difuzează în mediul de cultură ca ser specific din hârtie de filtru. Reuniunea toxina și antitoxina însoțită de formarea unui precipitat linii - floculare în formă de „antenelor“ sau „săgeată“ între culturile de accidente vasculare cerebrale. Ele pot fi văzute foarte clar prin luarea în considerare o ceașcă pe un fundal întunecat, cu o lupă. Liniile toxigene converg la periferia reciproc, iar dacă are tulpina toxigenic de control al creșterii, liniile sunt conectate pentru a precipita această tulpină. floculat toxigen (control) și tulpina nontoxigenic nu converg, și a trecut (Fig. 86).
În cazul detectării difterie morfologice tipice de bastoane răspunde: „difterie bacillus detectat.“ Ca răspuns la testele de diagnosticare, dacă nu există o creștere difterie bacili, care indică alte microorganisme obnaruzheny- ca răspuns la bacteriocarrier ei nu pot sărbători.
Exemplu.
ANALIZA № 1
Mucusul de la pacient în gât Nina Ivanova difteria.
Examenul bacteriologic de mucus de la gât bacilul difteric este detectat. Primit creșterea streptococi gram-pozitive.
Laborator (semnătură)
prevenire și terapie specifică. Imunizarea activă a copiilor cu scopul prevenirii se face prin introducerea de toxoid tetanic. În prezent, în practica medicală largă a inclus o combinatie de medicamente: difterie, pertussis si vaccin diftero-koklyushnostolbnyachnaya (DTP).
În unele cazuri, pentru prevenirea difteriei la copiii care sunt în contact cu pacienții, este necesar să se efectueze o imunizare pasivă prin injectarea de ser difterie antitoxică.
Cu scopul tratamentului intramuscular pacient sau ser difterie administrat subcutanat. Doza de variază în funcție de vârsta pacientului și severitatea bolii. Acțiunea sa este mai eficientă cu cât mai repede este introdus. ser antitoxic nu are nici o acțiune bactericidă și tratamentul pacientului poate rămâne bacillicarriers și pot infecta alte persoane.
acido-bacili
Grupul de bacili acidorezistente sunt agentul cauzator al tuberculozei (Mycobacterium tuberculosis) și agentul cauzator de lepra (Mycobacterium leprae). Mycobacterium genului se referă, de asemenea, numărul de bacterii saprofite care apar în sol, apă, lapte, unt și pe pielea umană (în separat prepuțului ori-M. Smegmatis). Pentru anumite proprietăți (formarea de forme ramificate și încetini creșterea anumitor micobacteriilor pe mediu nutritiv) mycobacterii similar cu ciuperci, ceea ce explică numele grupului (mycos - ciuperci). Bacteriile din acest grup a devenit cunoscut sub rezistente la acid, deoarece acestea au exprimat clar rezistență la acizi minerali: soluție 5-10% acid sulfuric și acid clorhidric, acestea sunt depozitate pentru o lungă perioadă de timp. Mai mult decât atât, acceptând unul sau altă culoare (de exemplu, magenta Guides), ele nu se decoloreze soluții de acizi minerali. În plus față de rezistența la acizi, microorganismele rezistente la alcalii, acest grup și alcool.
saprofite acide patogene sunt diferite de cele care nu sunt exigente din mediul nutritiv și să crească într-un interval larg de temperaturi.