Vibrio cholerae - microbiologie cu tehnica testelor microbiologice

Vibrio (Vibrio cholerae asiaticae), exterior R. Koch in 1883, este agentul cauzal al bolilor infecțioase acute severe - holera, care se caracterizează prin leziuni ale tractului gastro-intestinal, cu simptome de intoxicație și localizarea agentului patogen în intestinul subțire.

Fig. 81. Vibrio cholerae.
1 - o pur kulture- 2 - tampon isprazhneniy- 3 - lichefierea gelatinei.

Morfologia și proprietățile tinctoriale. Vibrio cholerae acordă o polimorfism pronunțată. Preparatele colorate are forma de lungime băț curbat de la 1,5 la 3 microni și o lățime de 0,2 până la 0,4 microni. Gradul de curbură este destul de diferit: în plus față de forma ușor curbat în formă de virgulă se formează un semicerc. Pe medii artificiale și în corpul oamenilor bolnavi Vibrio poate lua forma unor tije drepte, filamente lungi, spirale coci. Sporii și capsulele nu formează, este foarte mobil-monotrih (Fig. 81), toate ușor colorate cu coloranți de anilină, Gram.
Proprietățile culturale și biochimice. Vibrio cholerae undemanding medii de nutrienți, bun și rapid propagat pe solid și reacție alcalină medii lichide (pH 7,6-82), aerob strict, creșterea optimă de 37 °. La carnea de vită-agar cu extract alcalin prin
10-12 ore de incubare într-un incubator format rotund, mici (1-2 mm diametru) colonii cu o suprafață netedă, steklovidnoprozrachnye în lumina transmisă. Consistența colonii uleioase, la o mărire redusă a microscopului acestea sunt omogene, de culoare galben deschis. La un moment ulterior (după 18 ore de picioare într-un termostat) ele devin turbiditate. Pe agar Bacto TCBS (vezi. P. 287) colonii Vibrio cholerae sunt mari, de culoare galbenă, pe un fond de mediu albastru-verde dens. Atunci când în picioare de galben devine verde. colonie Aronson pe o culoare roșie strălucitoare medie cu un roz pal sau incolor buză și pe mediu Montsouris, după o creștere de 24 de ore, format transparent sau semitransparent colonie neagră gri cu turbiditate la margini. La un moment ulterior (după 48 de ore), creșterea coloniilor în dimensiune (3-4 mm) și să devină lipicios, cu un centru de negru și o margine bine tăiat. Pe apă peptonată alcalină deja după 6-8 ore de creștere apare film subțire, moale, bine vizibilă în peretele tubului la înclinarea mică. Acumularea de V. cholerae este rapid, astfel încât peptone apa ca mediu de selecție este utilizat pe scară largă în diagnosticarea precoce a holerei. Vibrio cholerae poate disocia, trecând de la forma literei S în R-formă. R-formă Vibrio cholerae peptone apă pentru a forma un film uscat dur, uneori încrețită. Vibrio cholerae este foarte activ biochimică. Fermentată pentru a produce un gaz de acid, fără glucoză, levuloză, sucroză, maltoză, manoză, amidon și lactoză lăsând neschimbat, arabinoză, dulcitol. Pe stab gelatină la o creștere de însămânțare apare ca o linie albă, și stabilește apoi diluarea cu suprafață ca bula (vezi. Fig. 81). Forme indol, amoniac și hidrogen sulfurat, restaurează nitratul la nitrit.
Holera Vibrio. Natura înconjurătoare (apă, pământ), oameni (in gura si intestine) si animale gasit Vibrio, morfológicamente și biologic similar cu Vibrio cholerae. Aceste Vibrio holera nu au nici o patogenitate, dar pot face dificilă diagnostic bacteriologic de holeră. Cele mai multe dintre Vibrio holeră holeră, spre deosebire de hemolyzing eritrocite de oaie și nu se degradează amidonul. Diferențierea caracteristică este abilitatea de a fermenta Vibrio cholerae manoză, zaharoză, lăsând arabinoză neschimbat. Pentru diferențierile precise ale Vibrio cholerae de holeră trebuie utilizat aglutinare cu seruri specifice și de a oferi o experiență cu bacteriofag holerei (pe cultura lizat selectată).
Structura antigenice și tipuri serologice. Vibrio cholerae are două antigen: antigenul flagelar H somatic O-antigen termostabila termolabile. Vibrio cholerae difera de holeră Vibrio numai O-antigen. Prin urmare, trebuie să se diferențieze utilizarea de seruri O-aglutinant, care aglutinează numai Vibrio cholerae. autori japonezi Vibrio cholerae împărțit în trei serotipuri: I (tip Inaba), II (tip Ogawa) și III (tip Gikoshima). In anul 1962, la recomandarea Organizației Mondiale a Sănătății (OMS), Vibrio cholerae, Vibrio atribuite El Tor. Numele acestui Vibrio a primit de la stația de carantină El-Tor în Africa, unde a fost izolat pentru prima dată în 1905 de la un pacient cu forma clinică de holeră și descrise în 1906 R. Gotshlihom.
Vibrio El Tor diferă de V. cholerae clasice care hemolyzing oi și capre eritrocite într-un mediu lichid (proba Greig) cauzează hemagglutination de pui rosii celule sanguine rezistente la polimixina antibiotic. Cu toate acestea, există o astfel de Vibrio El Tor, care este similar cu nu Vibrio clasice eritrocite hemolizate. Similarități și diferențe între V. cholerae sunt rezumate în tabelul. 19.
Rezistența. Stabilitatea Vibrio cholerae mici: încălzire la 56 ° acestea sunt păstrate nu mai mult de o oră. Prin acțiunea dezinfectanților sunt foarte sensibile: soluție 3% de acid carbolic le ucide în decurs de 3-5 minute, o soluție de clorură mercurică 1: 1000 - după 10 minute. Vibrio cholerae deosebit de sensibili la acizi: acid clorhidric și acid sulfuric, chiar și la o diluție de 1: 100000 ucide pentru câteva secunde.

Tabelul 19
semne de diagnostic diferențial Vibrio cholerae

Patogenitatea la animale și la formarea de toxine.
numai la om, in holera vivo. Animalele de companie au imunitate specifice holera. Mechnikov a fost capabil sa infecteze iepuri iziți, nipluri femele în lactație cultura Vibrio cholerae lubrifiante. La animale, simptome de leziuni intestinale asemănătoare cu enteritei holera la om. DK Zabolotny cauzate experimental boala holerei în veverițe, vskarmlivaya cultura de Vibrio cholerae.
În patogeneza bolii joacă un rol mare endotoxină și a produselor Vibrio de viață. Endotoxina este format din două componente:
a) căldură glyutsidolipoidnogo labili provocând înroșirea feței intestine și b) fosfolipida termostabil, provoca hipotermie (scaderea temperaturii corpului). Filtratele conținutul intestinal și fecale sunt factori toxici, printre care cele două cele mai importante sunt: ​​1) inhibarea reabsorbtiei de sodiu din canalul intestinal în krov- 2) cadaverina - creșterea permeabilității capilare intestinale la substanțe toxice Vibrio cholerae.
Patogenie si clinica holera. Sursele de infectie in holera poate fi: a) persoanele infectate cu holera, Vibrio cholerae care secreta scaun până la sfârșitul perioadei de incubare, în perioada prodromala yavleniy- b) pacienți cu diferite forme în holery-) g rekonvalestsenty-) vibriocarrier sănătoase. Holera Infectia apare prin gura atunci când consumul de alimente infectate, apa sau prin contact cu o persoană bolnavă, care este in scaun si voma emite cantitati mari de Vibrio cholerae. În acest caz, Vibrio cholerae este introdusă în gură cu mâinile contaminate de la noptiera si in contact cu diverse obiecte care conțin pacienții selectate (articole de uz casnic, lenjerie de corp murdare și așa mai departe. D.). Conținutul de acid al stomacului este un obstacol pentru promovarea în continuare a V. cholerae în tractul digestiv. Cu toate acestea, în cazurile de aciditate gastrică redusă, ahilii, cu prezența abundentă de băutură Vibrio sau produse alimentare în interiorul bucăților ele pot trece prin ele fatale la bariera acid din stomac și în duoden, și apoi în intestinul subțire. In intestin, Vibrio cholerae sunt mediul alcalin si abundenta de produse alimentare
defalcare de proteine, ceea ce le permite să se multiplica rapid.
În același timp, există o dezintegrare a celulelor microbiene cu eliberarea de endotoxină care necrotizantă epiteliului intestinal. Via limfatice și vasele de sânge deteriorate intestinale mucoasa endotoxină si reziduuri V. cholerae intră în sânge și provoacă întreaga holeră simptom - diaree, vărsături, perturbarea de apă și sare de schimb, condiții severe cu sistemele cardiovascular și nervos, toxicitate generală. Perioada de incubație holeră scurtă de 1-2 până la 5 zile. Boala apare de obicei brusc. Următoarele forme de holeră distinge cursul clinic al bolii:

1. enterită Vibrio (diaree Vibrio sau diaree). Aceasta este o formă ușoară de holeră. Diaree și vărsături în această formă a bolii poate fi singur, dar deshidratarea nu se observă aproape. starea pacientului este satisfăcătoare. Durata bolii este de obicei limitată la 1-2 zile;
2. gastroenterită Vibrio. Această formă de holeră cu o severitate medie. Gastroenterita începe de obicei dintr-o dată cu apariția diareei profuze, care devine din ce în mai frecvente de pana la 15-20 de ori pe zi. Președinte al pacientului, cu plutind în ea fragmente de epiteliu necrozat seamănă cu congee. Apoi se unește cu diaree și vărsături. Ca urmare, corpul pacientului brusc deshidratează apar convulsii grupe musculare individuale, voce ragusita devine, temperatura corpului scade. Starea precară de sănătate a pacienților. Ei se plâng de stare de rău, slăbiciune severă, gură uscată și de sete;
3. holeră algid. Aceasta este forma cea mai severă de holeră. Efectele clinice sunt aceleași ca și cea a gastroenterita, dar mai pronunțată. Pierderea de lichide poate ajunge la 8-10% din greutatea pacientului. Pielea este deshidratat, rece la atingere, se pierde turgescenta și merge să renunțe. Activitatea Cardiac atenuat brusc datorită creșterii vâscozității sângelui, există o puternică dificultăți de respirație, cianoză (cianoza), anurie (absența urinei), temperatura corpului este redusă la 35-34 °. Mortalitatea a fost mai mare atunci când această formă a bolii.

Acolo tranzitorie algidnye cele mai grele forme de holeră, care, în absența diareei și vărsăturilor ca urmare a taierilor sunt intoxicație fatală (holera uscată).

Patogenie, diagnosticul clinic și microbiologic de holeră stabilite în conformitate cu instrucțiunile și orientările privind diagnosticul clinic și de laborator, tratamentul și prevenirea holera.                                

Imunitatea. holeră Mutat lasă o dovadă suficientă immunitet- bolii recurente sunt rare. În corpul recupera de la descoperirea bactericidin, aglutinine, pretsipitiny și bacteriotropin.
Diagnosticul microbiologic. Material pentru testare de laborator pentru holeră sunt fecale si voma, obiecte contaminate cu secreții ale pacienților, materiale putrede, apă, alimente și așa mai departe. D. Holera aparține unui grup de infecții deosebit de periculoase, astfel încât materialul de gard și transportul acestuia la laboratorul însuși examenul bacteriologic necesită măsuri speciale de precauție. Material nativ (fecale și vomitus) colectate în navă individuală, se spală temeinic cu apă fiartă de posibilă soluție dezinfectantă reziduală. In partea de jos a vasului este plasat un vas mai mic sau foaie sterilă de hârtie pergament, celofan, etc. Folosind un metal steril, carton sau alocare linguri de lemn într-un volum de 10-20 ml a fost transferat într-un borcan cu gura largă steril, bine închise sticlă sau plută, care se află sub hârtie pergament. Un dop pe un borcan legat voschanoy strat dublu sau hârtie pergament. In absenta borcanelor gura larg mostre excreții pot fi plasate în tuburi sterile. În acest caz, materialul de transfer este tub de sticlă steril cu un diametru de 0,6-0,8 cm și o lungime de 6-8 cm. Forceps Tubulaturi aderență, linguriță izolarea și plasate într-un tub care este închis dop impermeabil.

Fig. 82. bucla specială pentru colectarea de material de pe holera.

Pentru a lua un material la pacienții cu gastroenterită severă este posibilă utilizarea unui cateter de cauciuc, al cărui un capăt este introdus în rect, celălalt este coborât în ​​cutie sau flacon. mișcări intestinale lichide sunt trase la vasul liber sau la o ușoară presiune pe peretele abdominal. Ia materialul de cercetare poate tuburi de sticlă, de asemenea, rectal, tampoane de bumbac rectale și o buclă specială. Balamalele realizate din sârmă de aluminiu, cu un diametru de 2-3 mm și o lungime de 40-50 cm, plierea de două ori (Fig. 82). O buclă sterilă este umezită cu soluție salină sterilă și administrată în rect de 8-10 cm. Material prelevată este inoculat pe un mediu nutritiv, sau plasat într-un fluid conservant. După utilizarea buclei dezinfectate prin fierbere.
La setarea segmente de diagnostic postmortem prelevate de sus, de mijloc și inferioare ale intestinului subțire de aproximativ 10 cm lungime. Segmentele sunt tăiate între cele două ligaturilor impuse la ambele capete ale secțiunii intestinului luate. Veziculei biliare este îndepărtat după legarea canalului în ansamblu. mostre de organe cadavru prelevate au fost plasate separat în borcane sterile cu dop de sticlă cu dopuri de plută sau de sus și legat dublu strat de hârtie de patiserie.
Pentru materialele care sunt trimise la laborator pentru analiză, asigurați-vă că pentru a atașa un document care specifică numele, numele de mijloc, numele și vârsta pacientului, locul și timpul de a lua materialul și denumirea, scopul, un diagnostic prezumtiv, și așa mai departe. D. Dacă este necesar, se transferă materialul în borcane de laborator la distanță sunt plasate într-un recipient metalic (Bix, găleți, vase) talaș schimbare, hârtie sau bumbac lână și plasate într-o cutie de lemn, care este legat, sigilat de ceara. Pe capacul cutiei cu cerneală sau vopsea face inscripția: „Top. Atenție „și în această formă este transmisă laboratorului prin curier.
Pentru a identifica rekonvalestsentam vibriocarrier si persoanele sanatoase care au intrat în contact cu surse de infecție sau de materiale infectioase, da un laxativ (25-30 g de sulfat de magneziu) pentru a colecta excrementele de lichid din partea superioară a intestinului. Probele de fecale au fost plasate într-un 1 ° / peptonă apă.

Vibrio cholerae este corpul uman destul de repede moare, astfel încât, dacă este imposibil de a explora materialul în următoarele 3 ore de la luarea acesteia, ar trebui să utilizați lichidul conservant.
Compoziția și metoda de preparare conservanți. 1,1% apă peptonată alcalină. Acest mediu este preparat din soluția stoc cu apă distilată diluare cu apă peptonată l de 10 ori.
Pentru soluția de stoc au fost amestecate într-un mojar peptonă 100 g peptonă uscat, 50 g de sare și 25 g de carbonat de sodiu. Acest amestec a fost dizolvat prin fierbere în 1 litru de apă distilată, apoi se adaugă 1 g de azotat de potasiu. Soluția a fost filtrată printr-un filtru de hârtie, în flacoane de 100 ml și sterilizate într-o autoclavă la 120 ° timp de 20 minute.
apă peptonată este turnat în eprubete (10 ml) și flacoane (50 ml) și se sterilizează prin aducerea pH-ului la 8.2-8.4 anterior.

1. apă peptonată alcalină cu tellurate de potasiu. Se prepară diluția de lucru de telurit de potasiu 1: 1000. S-a adăugat 1% apa cat peptonă alcalină după autoclavizare diluției de lucru telurit de potasiu la o concentrație finală de 1: 100 000. Mediul se prepară înainte de utilizare, sau nu mai devreme de 24 până la 48 de ore.

telurit de potasiu, produs sub formă de pulbere uscată sau o soluție de 2% în flacoane. Telurit serie ar trebui să fie verificate pentru absența acțiunii inhibitoare Vibrio cholerae,.

1. mediu tauroholatovaya telluritovaya peptonată alcalină (mediu lichid Montsouris). La 1 litru de apă distilată au fost dizolvate cu încălzire: 10 g tripticaz, clorură de sodiu - 10 g, taurocolat - 5 g, 1 g carbonat de natriya- a fost ajustat la pH 9,2, a fost turnat în fiole sau recipiente cu gât larg și dop filetat, autoclavat la 1,5 atm timp de 15 minute și se adaugă telurit de potasiu la o concentrație finală de 1: 100.000.
2. Conservante Venkatramena - Ramakrishnan. Se prepară o soluție stoc. În 80 ml apă distilată fierbinte s-a dizolvat 12,4 g de acid boric și 14,9 g de clorură de potasiu, se răcește și se ajustează la 1 litru. Din soluția de lucru de bază a fost preparată după cum urmează: 250 ml din soluția stoc a fost amestecată cu 133 ml de soluție de hidroxid de sodiu 0,8%, sub agitare, ajustat la 1 litru cu apă distilată și se adaugă 20 g de sare de mare uscate. pH-ul lichidului a fost ajustat la 9,2, se filtrează printr-un filtru de hârtie, repartizat în 10 ml borcane gura larg cu dopuri și sterilizate prin înșurubare într-o autoclavă de 15 minute la 120 °.

Etapele cercetării microbiologice. Etapa I. a) examenul microscopic. De la livrate la materialul de laborator (fecale, vomă) pregătesc mai multe accidente vasculare cerebrale, cu aer uscat și fixat cu lichid fixativ (amestec de alcool etilic Nikiforov). fixare de căldură nu este recomandată. O parte a frotiurilor colorate cu fucsin apos, altul - Gram. Preparatele colorate sub microscop, împreună cu forme tipice de Vibrio cholerae sub formă de baghete subțiri și curbate se pot întâlni forme coccoid și spirale bastoane similare cu microbi enteric grup tifoide. Rezultatul examinării microscopice este doar orientativ.
b) Examenul bacteriologic. Scaune, voma amestecă bine și se face cultura primară pe unul din mediile lichide și pe un mediu nutritiv solid. Ca medii de îmbogățire lichide recomandate 1% apă peptonată alcalină, 1% apă peptonată cu telurit de potasiu și mediu lichid Montsouris. Telurit Mediul este inhibitorie chiar la doze mici poate întârzia însămânțare holera reproducere. Ca mediu nutritiv solid sunt utilizate în agar alcalin paralel și unul dintre medii selective (agar, TCBS, miercuri Aronson, mediu Montsouris). De la pacientii cu holera severa si de la cadavre în mediul de stocare suficient de 0,1-0,2 ml semăna fecale, cu forme mai blande ale bolii, și 0,5-1 ml de normal - 2-3 g de fecale.
Culturile sunt incubate într-un incubator la 37 ° apă peptonată alcalină timp de 6-8 ore în apă peptonată cu telurit de potasiu, 12-24 ore pe un agar alcalin timp de 10-12 ore și 12-24 ore de medii selective.
cercetare bacteriologică continuă în următoarele 6 etape.
Etapa II. 1. Răsfoiți culturile pe acumularea medie 1, studia modelul de creștere pe ea.
Odată cu creșterea Vibrio cholerae în mediul lichid în decurs de trei ore după însămânțare ușoară opalescență observate, iar după 6 ore, este posibil să se observe apariția unui film subțire moale, bine vizibilă pe peretele tubului la înclinarea mică. La perioade ulterioare (8-12 ore), format de film albăstruie clar vizibile (atunci când se alocă tip clasic cholerae) sau un film alb-neuniform (alocarea cholerae biotip El Tor). In dezvoltarea focar epidemie de holeră, și ca rezultat al tratamentului cu antibiotice de pacienti pot prezenta variante aspre ale Vibrio cholerae (R-formă), care formează pe suprafața grosieri mediu lichid,, pelicula grele sau uscat încrețită.

1. Deoarece filmul de suprafață pe suportul de stocare 1 st prepara frotiuri, colorate și mikroskopiruyut. Când detectarea microbi similare Vibrio cholerae, determină mobilitatea în formulările și picături suspendate sau strivit prin placare o injecție în 0,3% agar adâncimea semifluide de 2-2,5 cm.
2. Atunci când un număr suficient de vibrios da reacție imobilizare cu O-ser etapizate contraste de lumină sau câmp întunecat.
3. Reseeding produc un mediu de stocare 1 la data de 2 prin transferarea de aproximativ 0,1-0,5 ml din stratul de suprafață al mediului într-o eprubetă cu 5.10 ml. același mediu.

6. face însămânțarea pe mediu de agar pe film de suprafață. Însămânțarea pe plăci, face o buclă cu un diametru de 5-6 mm, referindu-se la ea doar suprafața stratului de lichid.
Etapa III. 1. Aflați creșterea în a 2-a acumulării medie și de a face însămânțarea cu ea pe un mediu agar. De la un mediu de stocare a 2-a produce același studiu, care pe

1. etapă se realizează prin mediu de stocare 1.
2. Telespectatorii cupa cu culturi de material nativ, și colonii sunt selectate, suspecte împotriva holerei.
3. Coloniile selectate sunt analizate pe un mediu de lactoză zaharoză.
4. Alte caracteristici ale materialului de colonii, tipic holerei utilizat pentru identificarea rapida a microbi izolate.

Identificarea preliminară a Vibrio cholerae se realizează, pe baza morfologiei celulelor microbiene, morfologia coloniei și reacția de aglutinare aproximativă pe sticlă cu holeră O-ser diluat 1: 100 și un seruri tip specific la o diluție de 1:50.
Dacă există specifice Vibrio cholerae semne da un răspuns preliminar la rezultatul pozitiv al studiului.
Etapa IV. 1. Continuarea studierii coloniilor. Deoarece culturile realizate pe mediu lactoză sucroza, selectat culturi care scindează nonfermenting zaharoză fără gaz și lactoză (înroșire medie în coloana fără formare de gaz) pentru identificarea definitivă.
Identificarea finală a Vibrio cholerae se desfășoară pe baza morfologiei și a proprietăților tinctoriale ale celulei microbiene, proprietăți culturale, activități biochimice, agglyutinabelnosti antiseruri specifice și specifice acestui tip și sensibilitatea bacteriofagilor de diagnosticare.

1. Generarea de cupe de previzualizare cu semănatul de la prima apă peptonată, selectarea și studiul coloniilor suspecte de V. cholerae (a se vedea. Faza III, punctul 2).
2. Contabilizarea rezultatelor de identificare accelerate a avut loc în etapa III.

Etapa V. 1. Contabilizarea identificarea finală a culturii, izolate din materialul de însămânțare nativă. la
Vibrio cholerae cu proprietati tipice cauza mass-media pentru sâsâitură cu manoză și formarea de acid zaharoză fără gaz nu arabinoza descompus. caracteristică de fermentare carbohidraților nu este specifică doar V. cholerae și evaluate în combinație cu alte caracteristici de diagnostic, în primul rând cu serologică.
Proprietățile proteolitice ale culturilor izolate sunt înregistrate pe un 2-3 și zi. Vibrio cholerae produce lichefierea gelatinei este caracteristic în formă de pâlnie cu bule de aer în porțiunea superioară (vezi. Fig. 81). Cu toate acestea, există holeră Vibrio, care dau aceeași imagine lichefieze gelatină.
Determinarea proprietăților antigenice. Proprietățile antigenice ale culturii selectate este determinată așa cum este descris mai sus, pe diapozitiv într-un dislocat sau într-un eprubete aglutinare. holeră ser întreg O-aglutinant (uscată pre-dizolvată în 1 ml de apă distilată) a fost diluată cu soluție salină de la 1: 50 până la titru. La 0,5 ml din fiecare dintre diluțiile de ser care rezultă se adaugă 0,5 ml de cultură microbiană studiu suspensie conținând 1 mld. Organismele microbieni în 1 ml de standard, turbiditate holerei sau 500 milioane. SCI standard de bacterii № 5. Astfel, cantitatea de diluții de ser duble. Ultima reproducere trebuie să se potrivească cu titrul de ser indicat pe etichetă. Aglutinarea, ca de obicei, însoțite de controlul de control al antigenului și ser. După amestecare prin agitare tuburile au fost plasate pe stativele ultimele 2 ore un termostat la 37 ° C. După această perioadă a produs un rezultat de inventar preliminar. Rezultatul final de înregistrare realizată după 20 de ore de incubare tuburi, la temperatura camerei. Evaluarea rezultatelor se realizează prin metoda obișnuită.
Pentru a determina serotipul Vibrio cholerae da reacție de aglutinare pe sticlă cu Inaba seruri standard si Ogawa, diluat 1: 50 cu antigen de control în picătură de soluție salină. Cu un indicativ da reacție de aglutinare pozitivă detaliată a reacționat cu aceeași seruri, diluate la un titru.
Diferențierea între vibrios de tip clasic și vibrios El Tor efectuate pe baza culturilor lizat bacteriofagi diagnostic C și sensibilitate El Tor II- culturii microbiene la polimiksinu- aglutinarea testului eritrotsitov- pui hemoliza ovine reacție eritrotsitov- Voges-Proskauera- geksaminovogo.
Testele cu bacteriofagi de holeră. Pentru a determina biotip de V. cholerae holera utilizat bacteriofagi C și El Tor II, fabricat de industria medicală în formă lichidă, în fiole.
Pentru setarea reacției folosind un vas Petri, umplută cu 1,5-2% agar nutritiv pH 7,4-8,0. După pre-uscare a fundului mediului de cultură a paharului este împărțită în sectoare de numărul de diluții de 10 ori de fagi (de la solid la lucru) flacoanelor etichetei. Tubul conținând 3 ml de 6,0% agar Hottinger, topit și răcit la o temperatură de 46 °, s-a adăugat 0,1-0,2 ml culturi de 3-4 h în bulion de tulpini studiate Vibrio, cultura a fost amestecat bine și se toarnă pe suprafața de agar-agar în cupa Petri. După solidificare stratul de agar de plăci uscate timp de 30 minute la temperatura camerei și apoi în sectoare ale buclei centru se aplică un diametru de 2-3 mm diluții în picături per bacteriofagilor cup C, pe de altă parte - fagul El Tor II. Pentru uscarea picăturilor de fagi cupa a fost păstrat la temperatura camerei timp de 15-20 de minute, apoi răsturnat cu susul în jos și plasate într-un termostat la 37 °. Citește la 12-16 ore, în caz de urgență - în 4-6 ore.
Bacteriofag Deoarece numai activă împotriva holerei varianta clasică, El Tor bacteriofag II acționează numai pe varianta El Tor.
Sensibilitate la polimixină. Sensibilitatea culturilor microbiene la polimixină determinat prin însămânțare cultura microbiană investigată pe plăci de agar nutritiv cu pH 7,6, conținând polimixina M sau V, rata de 50 unități per 1 ml de mediu antibiotic.
Rezultatele iau în considerare creșterea culturilor după incubare la 37 ° C, timp de 18 ore. Cholerae El Tor polimiksinovoy cresc pe mediu, The cholerae Vibrio clasic pe ea nu cresc.

hemaglutinare de pui de celule roșii din sânge. Pe o lamă de sticlă a fost plasată o picătură de soluție salină și se triturează în aceasta bucla de 18 ore de cultură agar Vibrio investigat până la o pastă groasă, apoi se adaugă o picătură de suspensie 2,5% de eritrocite de pui, se spală de două ori cu soluție salină. Suspensie de eritrocite și sticlă Vibrio lumină swinging mixtă. Reacția este însoțită de două controale - în suspensie 2,5% de eritrocite într-o picătură agitată de ser fiziologic (eritrocite de control) și o suspensie a vibrios de testare într-o picătură de soluție salină (antigen de control).
Dacă rezultatul reacției (control negativ) aglutinarea hematiilor are loc în câteva minute.
Vibrio cholerae biotip El Tor pui aglutinează celulele roșii din sânge, clasic Vibrio cholerae nu provoaca aglutinare lor.
hemoliza hematiilor ovin (sonda Greig). La 1 ml dintr-o cultură peste noapte vibrios de testare crescute pe Hottinger bulion sau Martin, se adaugă 1 ml de 1% eritrocite de oaie suspensie sterilă prelevate. Un amestec de cultură și eritrocite agitat ușor și plasate în 2 ore un termostat la 37 °, și apoi incubate până în ziua următoare într-un frigider. După aceea să ia în considerare rezultatul reacției. eritrocite de dizolvare (lac de sânge) în absența hemolizei în tubul de control (suspensie de eritrocite într-un bulion steril) este marcat ca o reacție pozitivă.
semn hemoliza nu este specifică numai V. cholerae, cât mai multe Vibrio non-holera au capacitatea de a provoca hemoliza.
reacția Voges-Proskauer. Reacția este abilitatea de a forma o cultură microbiană atsetilmetilkarbinol. Pentru detectarea cultura investigată a fost inoculată în bulion fosfat glucoză-Clark (0,5 g de peptonă, 0,5 g glucoză și 0,5 g de fosfat de potasiu se dizolvă în 100 ml apă distilată). După 1-3 zile de incubare de însămânțare într-un termostat la 37 ° până la 1 ml de cultură în studiu s-a adăugat 0,6 ml de 2-naftol (soluție 6% în absolut
alcool) și 0,2 ml de 4%. Soluție de hidroxid de potasiu. Tuburile au fost agitate și plasate în 1 oră într-un termostat.
Dacă apare un rezultat pozitiv al caracteristicii de reacție a Vibrio El Tor sau rubin roz culoarea roșie a mediului, care se datorează atsetilmetilkarbinola formării.
testul Geksaminovy. Din cultura agar zilnică a Vibrio testul face semănat în 1 ml de bulion sau Hottinger Martin pH 7,6. Însămânțarea este incubat într-un termostat la 37 ° C timp de 24 ore, după care o buclă (diametru 0,3 mm) a suspensiei microbiene a fost transferat la 1 ml de mediu-glucoză geksaminovoy. Mediul inoculat a fost plasat într-un termostat la 37 °. Rezultatele permit 6-24 ore. Cholerae El Tor pentru culoare schimbare medie 6-8 ore de la verde la galben. Vibrio cholerae clasic în acest timp nu se schimba culoarea mediului, dar culoarea mediului se poate schimba de la o dată ulterioară.
Primele trei teste (diagnostic lizat prin bacteriofagi, sensibilitatea la polimixina și capacitatea culturilor de a aglutina pui de celule roșii din sânge) sunt principala, iar restul - filiala.
Astfel, identificarea finală a culturilor microbiene izolate suspectate de Vibrio cholerae, pe baza unui set de atribute, ne: rechislennyh în tabelul. 19.
Metoda de imobilizare a holerei Vibrio sub influența unui anumit O-ser și tipic bacetriofagilor holeră. Metodă și imobilizare influențate de ser O-specific microagglutination Vibrio holeră și bacteriofagii holera standard de diagnostic permite timp de câteva minute, la o concentrație de cel puțin excitatoare 4,3H10 celule în 1 ml de material de testat.
Reacția de imobilizare este specifică și permite un răspuns prim semnal în 15-20 de minute de la începutul studiului.
prevenire și terapie specifică. Prevenirea specifică holera se realizează prin imunizarea fenolului monovalent omorât V. cholerae. Vibrio bacteriofag si antibiotice specifice (tetraciclina, oxitetraciclina, clortetraciclina) utilizat pentru a trata cu succes.

Mediul nutritiv pentru cultivarea V. cholerae.

1. Agar alcalină. La un 1 litru de carne convențională peptoppogo agar se adaugă 30 ml de soluție de carbonat de sodiu 10%, fierte timp de 45 minute, reacția a fost verificată (pH 7,8-8,0), distribuită în flacoane și eprubete și sterilizate într-o autoclavă de 20 de minute la 120 °. Perioada de valabilitate 3 luni într-un loc răcoros.
2. Bacto-agar TCBS. mediu uscat pentru a diagnostica holeră (pH 8,6). La 1 litru de apă distilată ia 89 g din mediul uscat este încălzit la fierbere (până la dizolvare completă). Miercuri, nu de sterilizare, este turnat în ceașcă. organisme înrudite pe acest mediu, de regulă, nu crește, cu excepția anumitor tipuri de Proteus, formând o colonie de culoare galben închis.
3. Miercuri Aronson. Carnea-peptonă agar 3% se fierbe timp de 4-5 ore aparat Koch. La 100 ml de mediu fierbinte, se adaugă 6,5 ml de soluție de carbonat acid anhidru 100% de sodă și se sterilizează timp de 10-15 minute, la o temperatură de 100 °, după care 100 ml de mediu fierbinte, se adaugă 5 ml de soluție de zaharoză 20% și 5 ml dintr-o soluție 20% de dextrină, pre sterilizate într-o autoclavă sau prin filtrare, 0,4 ml de soluție alcoolică saturată de fucsină de bază și 2 ml de soluție proaspăt preparată de sulfit de sodiu 10%, sterilizat prin fierbere. Mediul finit răcit la o temperatură de 45-50 °, se toarnă în pahare.
4. Miercuri Mont sură (medie gelatină alcalină tauroholatovaya telluritovaya). La 1 litru de apă distilată într-o baie de apă la fierbere inițial dizolvat 10 g de clorură de sodiu și 15 g de agar-agar, și apoi, amestecând frecvent tripticaz - 10 g de taurocolat de sodiu - 5 g de carbonat de sodiu - 30 g de gelatină și Difco - 1 g ajustat la pH 8,5, se toarnă în balon 20 ml, cu dopuri de sticlă la sol și sterilizate la 1,5 atm. 15 miiut. Mediul este stocat într-un loc răcoros.

Înainte de a se varsa in cupele telurit de potasiu a fost adăugat la o concentrație de 1: 200 000. Plăcile cu mediul poate fi utilizat timp de 5 zile. coloniile de Proteus pe acest mediu au fost observate un centru gri și marginile norului.

1. Lactoză-zaharoză (poliuglevodnaya) mediu. La 1 litru de apă distilată au fost dizolvate cu încălzire: peptonă - 0,5 g de clorură de sodiu - 0,5 g-1 g de lactoză, zaharoză - 0,1 g, agar - 1 s-a adăugat 4 ml indicator Andred instalat pH - 7,4, distribuită în coloană înaltă flacoane și sterilizate prin autoclavare la 112 ° timp de 20 minute. Mediul pregătit după sterilizare, Russell cosite ca mediu și seed a produs prin metoda obișnuită.

Holerei și Vibrio holeră, despicarea roșeața randamentul de zaharoză în coloana fără formarea de gaz. Dizenteria și febra tifoidă parathyphoid bacteriile nu se schimba culoarea mediului. E. coli forme cu gaz de acid în coloană, iar porțiunea înclinată a mediului.

1. Glucoza-geksaminovy ​​bulion. S-a adăugat hexamine cristalin (hexamină) într-o cantitate de 1 g la 100 ml bulion nutritiv, pH 7,1. Într-o altă sticlă cu 100 ml din același bulion au adăugat 1 g de glucoză. Ambele soluții de 1% sterilizată prin filtrare printr-un lumânări bacteriene și depozitate la o temperatură de 10 °. Înainte de a stabili reacția 100 ml soluție sterilă de glucoză se iau 50 ml și 50 ml dintr-o soluție de hexamina. pe

100 ml de bulion-glucoză geksaminovogo s-a adăugat 0,1 ml dintr-o soluție alcoolică 1,6% din bromtimol mediu indicator albastru ar trebui să aibă o culoare iarbă verde.

1. Kodama miercuri. În 100 ml de apă se dizolvă 1 g de peptonă, 0,5 g de amidon solubil, ajustat la pH 7,4, în flacoane sterile cu 5 ml și se sterilizează prin fracțională la 100 ° timp de 3 zile la 20 de minute.