Bacteria dizenterie - microbiologie cu tehnica testelor microbiologice

BACTERII dizenteriei (Shigella)
Dizenterie - o boala infectioasa caracterizata prin leziuni ale colonului și fenomenele de intoxicație. Agentul cauzal al acestei boli este un grup de bacterii, unite printr-un nume generic comun - Shigella în onoarea microbiolog japonez Shiga, care a demonstrat rolul acestor bacterii în etiologia dizenterie.
Există două tipuri de boli dizenterie: 1) dizenterie amoebic cauzat dizenteria amoeba și apare predominant în țările calde, și 2) dizenteria bacilară cauzate de bacterii dysenteric și larg răspândite.
dizenterie Wand izolat pentru prima dată în cultură pură AV Grigoriev în 1891. tipuri Doar mai târziu au fost separate și tipuri de bastoane dizenterie.
În 1962, a fost adoptată clasificarea sovietică de dizenterie bacteriană (Shigella), pe baza caracteristicilor antigenice și biochimice au fost puse principalii reprezentanți inerente acestui grup de microorganisme.
Conform acestei clasificări (. Tabelul 16), Shigella împărțit în două grupe:
1) manitol nonfermentative (mannitotritsatelnye) și 2) fermentează manitol (mannitpolozhitelnye).
Primul grup include trei tipuri de bacterii: Grigoriev-Shiga-montaj si Schmitz Lardzh-Sachs care structura antigenica împărțit în 8 tipuri, al doilea - două specii: Bacteriile și Flexner sonnei. Vezi Flexner în proprietățile lor enzimatice și serologice, împărțit în trei subspecii: real Flexner, Nyukestl și Boyd.
subspecii structura antigenica Flexner împărțit în 5 variante serologice și subspecii Boyd - 15. Bacteriile Nyukestl fără specii serologice prin proprietăți biochimice sunt împărțite în trei subtipuri (vezi Tabelul 18 ..). Bacteriile Sonne variante serologice nu au, dar au tendința de a disociere pe un mediu nutritiv solid. În procesul de disociere a format colonii netede și rugoase.

bacterii Clasificarea dysenteric domestice (genul Shigella)

1. Nu este clar ce aparține speciei,
2. Lipsit de antigene tipice.
3. Trei tip enzimatic.

Fig. 80.

Smooth Colony (S-form) sunt mici, transparente, incolore, cu margini netede (Fig 80.) - Colonia aspră (R-formă) - mai mare, plat, dur, cu margini zimțate, mai puțin transparente decât colonii netede.                                                   
Morfologia și proprietățile tinctoriale. Dizenterie bacillus dimensiune, formă și colorație similară cu întregul grup de febră tifoidă. Spre deosebire de acesta din urmă, ei încă.
Proprietățile culturale și biochimice. Dizenterie bacil cresc pe un mediu nutritiv obișnuit, cum ar fi bacteriile tifoide. Pe medii cu hidrați de carbon au o activitate enzimatică mai scăzută comparativ cu alți membri ai grupului tifoide enteric cu bulion de creștere nu formează hidrogen sulfurat.
bacteriile Dysenteric nu fermentează lactoza alți carbohidrați, descompuse numai la acid. Batoane Sonne determina o formațiune lentă și slab acid într-un mediu cu lactoză (a doua zi).
Pentru a distinge bețe dizenterie de tifoidă, paratifoidă și unul de altul sunt utilizate: 1) raportul dintre glucide, 2) pentru a studia mobilitatea, 3) reacția de aglutinare. Asemănarea și diferență semne bacteriile dysenteric arătate în tabelul. 17 și 18.
Tabelul 17: Proprietățile biochimice ale dizenteriei bacteriene (Shigella)

opțiuni biochimice subspecie Nyukestl1
Legendă: + fermentează pentru a forma acid- ± nu fermentează always-- nu fermentat.
Tabelul 18

Legendă: K - este fermentat pentru a forma acizi, CG - acidul fermentat pentru a forma un gaz- și denumirile în paranteze indică întârziate reacție, observare se efectuează timp de 15 zile la 37 °.

Rezistența. Rezistența în diverse bețe dizenterie nu este același lucru. De exemplu, Shiga bacilul lumina directă a soarelui Grigoreva- uciși în 30 de minute, iar bacteriile și Flexner sonnei - 3 pe oră. In sol Grigoriev-Shiga bacillus salvat o medie de 45 de zile, și Flexner și Sonne - 65 de zile. În dizenterie gheață bacil stocate timp de săptămâni sau luni. Încălzirea la 60 ° ucide-le timp de 10 minute. Fenolul și înălbitor în concentrații convenționale bacterii dysenteric ucide în 30 minute.
Patogenitatea la animale și la formarea de toxine. În condiții naturale, animalele nu sunt sensibile la boli și dizenterie bacteriană. infecție artificială prin gura rămâne neconcludent. bacteria dizenterie Grigoriev-Shiga produc exotoxină. Exotoxina destul de rezistent în raport cu temperatură ridicată și încălzire la 70 rezistă °. Alte tipuri de tije dizenterie sunt mai puțin toxice și emit numai endotoxină.
Patogenie si clinica. Sursa de infecție cu dizenterie este o persoană bolnavă, convalescenți și bacillicarriers. Infectarea dizenterie are loc prin contact casnic sau prin alimente infectate si apa. germeni dizenteria intră în organism prin gură și localizate în mucoasa colonului și pot provoca aici prima catarală acută, și apoi inflamația diphtheritic. Ulterior, procesul necrotic se dezvoltă, având ca rezultat formarea de ulcere. Perioada de incubație este scurtă cu dizenterie - de la 2 până la 5 zile. Simptomele caracteristice: oboseală, vărsături, febră, letargie, lichid, mucus initial si scaun, apoi spotting, scaun frecvente, de până la 40 de ori pe zi, este însoțită de durere severă. Foarte caracteristic tenesmus dureroase - care deține nevoia de a defeca.
Formele toxice și severe de dizenterie cauzate de Shiga bastoane Grigorieva, și unele specii de bacterii. amenajare Schmitz În prezent, cea mai comună formă de dizenterie cauzate de bețișoare Flexner și Sonne.
Imunitatea. In imunitatea dizenterie slab exprimat, cu toate că în sângele pacienților prezintă anticorpi diferiți (aglutinele, bactericidin, opsonins, complement anticorpi și antitoxine - dezinterie cauzate de Shiga-stick Grigoriev și forme toxice de dizenterie fiting - Schmitz).
Acest lucru, aparent, explică posibilitatea trecerii de forme acute de dizenterie cronică. Lipsa de eco-imunitate (unii împotriva anticorpilor bacterieni speciespecifice formate numai) face posibilă repetarea bolii dizenteria dacă infecția se produce alte puncte de vedere.
Diagnosticul microbiologic. Pentru studiul privind dizenterie trebuie să utilizeze fecale proaspete, eventual, doar obtinut de la pacient, în caz contrar procentul de rezultate pozitive este redus în mod semnificativ.
Pentru colectarea fecale se recomandă să se utilizeze plăci sterile de hârtie și șervețele, care sunt puse într-un vas, se spală cu apă fierbinte (nave de prelucrare sau soluție oală dezinfectant nu este permisă, deoarece cantități mici de ultima ucidere dizenterie bacilul). În timpul transportului pe distanțe lungi fecale fecale colectate a fost plasat într-un tub larg de lichid de stocare (30% glicerol neutru și 70% soluție salină) într-o cantitate de 13 până la 23 de fecale (10,5 ml) la acest amestec. Tuburile trebuie depozitate într-un loc întunecos, la o temperatură scăzută. fecalele însămânțarea trebuie să fie nu mai târziu de 12-24 ore de făcut după luarea.
Se poate servi ca o soluție salină hipertonică conservant 1,5-3% și au primit recent pe scară largă în rândul acumulării Leyfsona. Compoziția acestui mediu este inclus selenistokisly de sodiu, care stimulează creșterea dizenteriei bacteriene, în timp ce suprimarea dezvoltării concomitente a microflorei (E. coli, stafilococi, enterococi și alți microbi).
Prepararea selenitovoy mediului Leyfsona. La 1 litru de apă distilată s-a dizolvat 7 g de fosfat acid disodic anhidru, 3 g de fosfat de sodiu monobazic (NaHP04), 5 g de peptonă (firma cehoslovacă „Spofa“ sau maghiar „Richter“), 4 g de lactoză, umplută în fiole de 50 ml și sterilizate care curge abur timp de două zile la 30 m la o temperatură de 112 ° timp de 30 minute.
preparate separat în apă sterilă, soluție 10% acid de sodiu selenitokislogo (NaHSeCb). Înainte de utilizare, fiecare flacon conținând 50 ml din soluția stoc a fost adăugat 2 ml dintr-o soluție de selenistokislogo de sodiu și mediu gătit este distribuit în eprubete sterile în 5-7 ml n închis ermetic,
Înainte pregăti un mediu pentru utilizare, este necesar să se determine proporția exactă de fosfat, care cu peptonă proba de testat și selenistokislogo acid de sodiu dă pH nu mai mare decât 6,9-7,1, care este controlat prin modificarea fosfații raportul cantitativ.
Asemenea podtitrovka făcut de fiecare dată când modificarea unei serii de ingrediente medii (peptone, selenistokisly fosfați de sodiu acide).
Materialul de captare poate fi realizată prin intermediul unor tuburi de sticlă cu capete opayannymi sau cu un tampon de bumbac.
buclă de platină prins umflătură mucoase sau mucopurulentă, care este re-clătite în soluție salină sterilă și inoculate în trei cești secvențial cu mediu agar Bacto sau Levine J.
După 24 ore de cultivare într-un incubator de însămânțare explora colonii incolore transparente circulare ușoare. colonii suspecte sunt cernute pe o pantă pe manitol și număr scurt colorate cu lactoză și glucoză, iar 24 de ore mai târziu, să ia în considerare rezultatele obținute.
Concomitent cu materialul de colonii incolore plasate aglutinarea aproximativă cu specii și, dacă este necesar monoretseptornymi seruri tipice. Reacție pozitivă cu una dintre seruri confirmă microb care aparține grupului de dizenterie. Rezultatul studiului (pre) pot fi emise după 24 de ore.
În loc de o serie scurtă de novac poate folosi mediul Russell. Acest mediu este convenabil, deoarece acesta înlocuiește cele trei tuburi. În schimb, înclinația este teșită mediu de suprafata Russell (cu medicamente, ei fac aglutinarea indicativ). Când fermentația lactozei și o coloană a mediului și suprafața teșită colorată indikatoru- respectiv în timpul fermentației coloanei medie a glucozei numai colorează culoarea în consecință redusă a indicatorului, iar gazul se acumulează în partea inferioară și sub formă de bule rupe agar. Glucoză în Split mediu Russell numai în condiții anaerobe. Cultura, fermenta lactoza asupra mediului Russell în prima zi, este considerată non-patogenă și să dea un test negativ. Aceeași cultură care fermentează glucoza numai la acid, sunt pentru studii suplimentare. Se prepară medicament pentru colorația Gram și determină mișcarea și să dea testul de aglutinare pe o lamelă de sticlă. Este recomandabil să se utilizeze un amestec de seruri împotriva predominante în zonă și tipurile de specii de Shigella (de exemplu, Flexner, Sonne, Nyukestla). Cu un rezultat pozitiv, cultura testat separat polivalenți anti-Flexner ser, ser și ser Nyukestla Sonne,
Pentru a determina tipul și subtipul selectat cultura flexneri, a fost testat în reacția de aglutinare pe sticla mai întâi cu seruri etalon (I, II, III, IV și V), și apoi cu grupul (3, 4, 6, 7 și 8). Pentru identificarea finală a mediului de cultură izolat sunt însămânțate în Hiss manitol, maltoză și zaharoza într-un tub de testare cu un bulion Hottinger pentru determinarea hidrogenului sulfurat și indol.
Baza următoarelor simptome servesc pentru distribuirea test pozitiv: selecție negativă gram, solenoid tipice fixe prin cultură și proprietăți antigenice caracteristice ale Shigella.
Unii pacienți cu stick-uri de stand atipice, care nu sunt specifice fiecărui tip de ser aglutinante. In astfel de cazuri, microb care aparține grupului de eșantion set dizenterie la selectat fagi liză culturii dezinteriynym bacteriofagi polivalenți.
Detectarea bacteriilor de dizenterie prin creșterea fagului titrului. Scaunele fără conservanți au fost cântărite și acoperite la aceasta carne-peptonă bulion (pH 6,8-7,0), rata de 10 ml per 1 g de fecale, este scuturat cu bilele, stabilit timp de 5-10 minute. Suspensia rezultată a fost turnată în 2 tuburi largi de 9 ml în fiecare. 1st 1 indicator ml fag (pentru detectarea bacteriilor de dizenterie) diluat 1: 100 în data de 2 - 1 ml de bulion. Al treilea tub 9 se toarnă bulion ml și 1 ml din trasor în diluțiile de lucru ale fagului. Din cele trei tuburi 1-I este un experimentat, 2a servește drept control pentru prezența fagului liber, al treilea - controlul indicatorului fagului titrului. Tuburile au fost plasate într-un termostat la 37 ° C timp de 4,5-5 ore pentru a crește fagul. Conținutul fiecărui tub este diluat în bulion 500-1000 ori sau mai mult, astfel încât 1 ml din treilea tub (fagul de control) pentru a obține o astfel de cantitate de colonii de fagi negative, care pot fi numărate (10-20 de corpusculi). Tuburile sunt încălzite pentru a inactiva microbii într-o baie de apă la 56-58 ° timp de 30 minute. Apoi, se aplică metoda de agar straturi, ceea ce permite determinarea cantității de bacteriofag dizenterie corpusculi. Această metodă este după cum urmează. Trei cupe Geidenreich - Petri se toarnă 1,5% agar carne-peptonă bine uscat, și apoi turnat în al doilea strat,
care constă în 2,5 ml de 0,7% agar topit, 0,1 ml de spălare bacterii dysenteric referință cultură și amestecul încălzit de 1 ml din tuburile 1, 2, 3-d (în fiecare cană de amestec). După 20-30 de minute, cupa a fost plasată într-un termostat la 47g de 5 ore și apoi să ia în considerare rezultatele spoturilor de reacție într-un vas steril cu materialul de testat (I-1 cana) si un control (2 si 3).
Crescută bacteriofag titru (globulele bacteriofagi) mai mult de 5 ori în prima cupa, comparativ cu martorul indică prezența în materialul bastoane dizenterie.
In dizenterie cronice pentru diagnosticarea unui ser bolii pacientului poate fi pus: 1) opsono-fagocitare reaktsiyu- 2) se completează reacția de legare, și 3) reacția de aglutinare.
Metode de reacții de formulare de aglutinare analoage formulării reacției Widal, cu singura diferență că tuburile incubate timp de 18-20 ore.
In prezent, diagnosticul de dizenterie utilizat pe scară largă reacția hemaglutinare pasivă cu diagnosticums eritrocitare Sonne.
bacteria dizenterie cultura dedicat, de asemenea, testate pentru sensibilitate la antibiotice.
prevenire și terapie specifică.
Împrejurimile imediate destinate dizenterie purtător sau un pacient cu dizenterie cronică utilizat ca un agent profilactic. bacteriofag.
sulfamide (sulgin, ftalazol și colab.), antibiotice (sintomitsina, biomycin, cloramfenicol, streptomicină) este utilizat pentru tratamentul dizenteriei. In cazul formelor toxice severe ale bolii sunt administrate ser protivodizenteriynoe antitoxică. In tratamentul dizenteriei cronice sunt vaccin alcool VA Chernohvostova.