Imunitatea dobândită - microbiologie cu tehnica testelor microbiologice

Imunitatea, care apar ca urmare a infecției sau a substanțelor artificiale introduse în organism de natură antigenică, denumit în mod obișnuit postinfection și postvaccinare respectiv. Și astfel imunitate sunt în mod substanțial aceleași mecanisme de reglementare care sub imunitatea naturală, procese și anume. E. Selecție, fagocitoza, reactivitatea în general, proprietățile de protecție ale pielii și mucoaselor. Formarea de anticorpi, care este în general considerată o formă specifică de protecție, poate fi considerat, de asemenea, din punct de vedere al funcțiilor fiziologice ale organismului.

Antigene și anticorpi

Antigeni sunt substanțe care au capacitatea atunci când organismul de a provoca formarea de anticorpi în acesta.
Proprietatea principală este capacitatea de antigeni induc formarea de anticorpi specifici și de a reacționa cu anticorpi deja formate. O manifestare condiție acțiune antigenice este: 1) străinătății (eterogenitate) a antigenului pentru organizma- 2) administrarea parenterală antigenului (ocolind tractul gastrointestinal).
Antigenii sunt de înaltă calitate și inferior.
antigenele complete capabile de a determina formarea de anticorpi și se unesc în reacție. antigene de grad înalt sunt în principal substanțe de origine proteine, iar acestea trebuie să fie coloidal și solubil în fluidele corporale.
antigeni defecți sau haptene, reacționează cu un anticorp, dar nu este capabilă să provoace formarea de anticorpi în organism. antigene Inferioare sunt lipide, carbohidrati si alte substante. Haptenele devin antigene complete, adică. E. dobândi capacitatea de a induce formarea de anticorpi, adăugând la ei unii, deși foarte mici, cantitatea de proteină.
Celula bacteriană din cauza complexității structurii sale constă dintr-un număr mare de antigeni compleți - proteine ​​și antigene defecte - haptene. bacterii motile posedă doi antigeni - termolabile (ablația la 80 °), asociat cu flagella care poartă numele și flagelar (H-antigen) și termostabilă (nu ablating la 80-100 °), asociat cu citoplasma bacteriilor, așa-numita somatic (O -antigen). Odată cu pierderea mobilității H-antigen este pierdut. Imunizarea bacterii motile sunt formate și anticorpi față de acestea, pentru un antigen diferit.
Rezultând din extracția bacterii producătoare de acid tricloracetic complex antigen somatic este format din lipoidopolisaharidoproteinovogo (antigen complet). In bacilul tifoide, bacteriile care cauzează intoxicații alimentare, în plus față de H și O-antigeni, setați un alt antigen special - antigen virulență (Vi-antigen). Bacteriile care formează capsula au antigenul capsular specific, antigene diferite pe celula în sine.
Anticorpii sunt substanțe de origine proteine, produse în organism prin administrarea parenterală a antigenilor.
Anticorpii sunt caracterizați prin aceea că, legat numai cu acele antigene împotriva cărora sunt elaborate de către organism (specificitatea anticorpului):
Anticorpii pot fi prezente în cantități mici în serul indivizilor sănătoși, neimunizate (anticorpi normali). ser Număr aititel (titru acestuia) sunt crescute în mod semnificativ ca urmare a infecției sau imunizare artificială.
Anticorpii intră în reacție cu un antigen specific, care se caracterizează prin diferite apariții. Astfel, atunci când amestecarea serului imun cu bacteria poate observa fenomenul de adeziune a microbilor suspendate într-un lichid cu precipitarea ulterioară a unui precipitat (aglutinare), la un sistem experimental definit - dizolvarea microbi (bacteriolysis). Când este amestecat cu ser a suferit o toxina difterica, bacili difteria poate fi detectată de neutralizare acțiunea toxică a toxinei (proprietatea ser anti-toxic). Serul imun prin reacția cu antigene care sunt într-o stare dizolvată, dă reacție de precipitare - precipitare. Dupa anticorpi de imunizare a produs care cresc fagocitare (opsonins și tropanes) și anticorpi, se completează cu caracter obligatoriu, precum și introducerea de eritrocite străine în anticorpi serici acumula - hemolizinei da hemoliză.
Astfel, în funcție de modul de acțiune al unui antigen și o manifestare externă a reacției sunt următorii anticorpi: antitoxine (toxina neutralizare) aglutinele (cauzând aglutinare și precipitarea bacteriilor) bactericidin (dizolva bacteriile), bactericide (bacterii-ucidere) anticorpi de neutralizare pretsipitiny ( provocând un precipitat specific antigen - un precipitat) și opsonins tropanes (creșterea funcției fagocitare), hemolizina (cauzând dizolvarea celulelor roșii din sânge), complement antite la și altele.

Mecanismul de formare a anticorpilor

Anticorpii sunt formate numai în corpul uman sau animal.
Există mai multe teorii și ipoteze pentru a explica mecanismul de formare de anticorpi. Conform datelor recente copula imune sunt modificate ser globulină, care diferă de prezența normală a centrelor active responsabile pentru conectarea la antigen, și sunt formate în țesutul limfoid: ganglionii limfatici, splină, ficat, endoteliul vascular, măduvă osoasă, etc., t ... e. în aceleași organe, care sunt sintetizate de serum normale. Cu toate acestea, rolul diferitelor elemente celulare de țesut limfoid în proces variază. Valoarea principal în producția de anticorpi aparține celulelor plasmatici. Dupa perceptia imunizare stimulare antigenică este realizată de către macrofage, care apoi transmit informații despre antigen la diferite celule de țesut limfoid capabil să formeze globuline specifice (anticorpi), m. E. Antigenul aparține rolul imediat formatoare în sinteza de anticorpi. Aceasta explică specificitatea anticorpilor și capacitatea lor de a se conecta atât antigenul in vivo (în organism) și in vitro (eprubetă).
Formarea și izolarea anticorpilor de către celulele are loc in doua faze. În prima fază inductiv (latentă) sinteza anticorpilor, în selectarea a doua producție a anticorpilor din organele limfoide în sânge. Activitatea tesutului limfoid este stimulat hormonul timusului.
Se bucură de o mare recunoaștere a teoriei de selecție clonală de Burnet. Conform acestei teorii la animale și oameni, în mod normal există celule capabile să sintetizeze anticorpi. Antigen numai selektsioniruet și stimulează activitatea acestor celule.
Anticorpii cu boala sau imunizare format imediat, dar după o anumită perioadă de timp în care are loc transpoziția răspunsului imunologic al organismului la sinteza globuline imune - anticorpi. De obicei, în bolile infecțioase anticorpi apar după 5-6 zile, iar sub imunizare toxoid după 2-4 săptămâni. titrul de anticorpi crește treptat, atingând cea mai mare cifră de la sfârșitul bolii și cu imunizarea la momente diferite de la 2-3 săptămâni până la 2-3 luni. Apoi, cantitatea de anticorpi scade rapid la început, apoi încet, ele pot dispărea complet sau să rămână într-o anumită sumă în organism. Momentul titrului de anticorpi depinde atât de natura antigenului, precum și caracteristicile individuale ale microorganismului.

Răspunsurile imune și utilaje serologie

Studiile serologice bazate pe interacțiunea specifică a serului imun cu antigenul adecvat (suspensie microbiană într-o soluție fiziologică de clorură de sodiu, extractele, toxine).
Forma manifestări ale interacțiunii antigen cu un anticorp variază și depinde de structura de antigen și mediul în care compusul acestuia. Afișaj extern reacției poate fi sub forma de microbi bonding m. E. aglutinare, precipitare (sau precipitare), dizolvarea microbilor (sau bacteriolysis) și t. D. Aceste reacții imunologice este specifică și foarte sensibilă, însă metoda de investigare serologică a fost utilizat pe scară largă.
reacția imună sunt larg utilizate în scopuri de diagnosticare și în producerea de seruri terapeutice si vaccinuri.

Neutralizarea antitoxina toxine
anticorpul antitoxina este capabil să conecteze cu exotoxine și a le neutraliza. proprietăți antitoxice demonstrative seruri detectate numai la animale experimentale susceptibile la exotoxină corespunzătoare. Cand se amesteca doze mari de toxină cu suficientă antitoxică seroneutralizare imun produce toxine, iar astfel de amestec, atunci când se administrează la animalul susceptibil nu tulburări patogene.
Ser forța de neutralizare corespunde sumei conținute în acesta antitoxine. Această cantitate este determinată de unități convenționale. De exemplu,
Unitate antitoxică audio (1 AU) o antitoxina difterică ia în considerare cantitatea de antiser care neutralizeaza 100 doze minime letale de toxină difterică (Dim - doza minimă letală, adică, cantitatea minimă de toxină care ucide cobai cântărind 250 de grame pe zi 2 .. ).
În interacțiunea în ser antitoxic specific in vitro cu pierderea toxina corespunzătoare apare floc. Acest fenomen se numește floculare.
Pentru a determina puterea de ser antitoxic Ramon a sugerat că folosesc fenomenul de floculare. Pentru a face acest lucru într-un număr de eprubete amestecate cu o anumită cantitate de toxină tuturor dozelor descrescătoare ser antitoxic. In vitro, unde neutralizarea completă a precipitatului toxină și iluminare lichid are loc mai devreme decât în ​​alte tuburi - există un (primar) reacția inițială de floculare.
Fenomenul floculare utilizat practic în determinarea serul care produce forțe ser antitoxic.

aglutinare
Când a adăugat la serul imun omolog bacterian în suspensie se produce bacterii clustering gradate pentru a forma bulgări vizibile cu ochiul liber format din corpuri bacteriene și depuse pe fundul tubului. Acest fenomen se numește test de aglutinare (fig. 53 și 54). Această reacție a fost folosit cu succes pentru diagnosticul infecțiilor bacteriene. Cand bacteria motile imunizare a produs aglutinele împotriva flagelar și împotriva antigenelor somatice (flagellar sau H aglutinine și somatice sau O-aglutinină), și aceste două tipuri au diferite aglutinina caracter.

Fig. 53. reacția aglutinare atunci când este observată cu ochiul liber.

Fig. 54. reacția aglutinare atunci când este observată printr-o lupă.

Fig. 55. seroscopy.

aglutininelor flagellar cauza formarea rapidă a fulgilor în vrac. aceeași aglutininelor somatici acționează lent, și acumularea de bacterii formate de acestea au caracter de granule fine.
Dacă aglutinarea este slab vizibile cu ochiul liber, se poate observa în seroscopy (Fig. 55).
Mecanismul de aglutinare. reacția de aglutinare constă în două faze: prima - bacterii compuse aglutinele, al doilea - sub influența reglări de bacterii electroliti.
Efectul protector al aglutinele sunt discutabile datorită faptului că celulele microbiene precipitate în procesul de aglutinare nu suferă modificări morfologice semnificative. Ei își pierd mobilitatea lor, aglomerarea împreună, dar rămân în viață și poate continua să se înmulțească. Putem presupune că în grămezi asamblate cu ușurință fagocitozate bacterii sau expuse la alți anticorpi (de exemplu, lizină). Astfel, aglutininele implicate în protejarea organismului prietenos cu alți factori de imunitate.
reacția Aglutinarea este larg utilizat în scopuri de diagnosticare. Aglutinarea este specifică, astfel încât în ​​cazul pacientului seroaglutinare bacteriile care cauzează specii cunoscute, rezultă că un pacient care a atras ser, suferă de o boală cauzată de germeni din aceeași specie. Dacă serul aglutinant imun obținut de la un animal imunizat cu un anumit tip de microb, o cultură aglutinează patogen izolat de la pacienți, ceea ce înseamnă că microbii prezumtive și bacteriile care produc imunizarea aparțin aceleiași specii.
Astfel, în unele cazuri, pentru a diagnostica serul bolii pacientului a fost luată, iar în laborator pentru a fi testate direct sau ucise cultura microb corespunzătoare, în altele - investigat microorganisme izolate din organism, iar serul imun corespunzător ar trebui să fie în laborator.
Aglutinine poate reacționa cu microorganismele înrudite, dând grupă aglutinare. Acest fenomen se explică prin antigenelor grupei generale. De exemplu, aglutinanți diluții tifoide serice în bețișoare împreună nu numai tifoidă, paratifoidă ci și bacterii.
trebuie să aibă o setare pentru reacțiile de aglutinare: 1) serul pacientului sau ser diagnostic aglutinare (obținută de la animalele imunizate) - 2) culturi de microbi sau soluție salină fiziologică-antigen 3), aglutinarea nu apare în sare liberă media (apă distilată).
aglutinării cu serul pacientului. Sângele pacientului este preparat aseptic prin venipunctură sau degetul puncție, în primul caz, într-o cantitate de 5,2 ml, în al doilea - într-o cantitate de 1 ml. Sânge lăsat timp de 1 oră la temperatura camerei cu o pipetă Pasteur de fibrină cheag este separată de peretele tubului și la o mai bună ser de decantare este plasat într-un ghețar. Serul supernatant este aspirat cu ajutorul unei pipete și transferat într-un alt tub. Se transferă serul produs într-un tub închis etanș sau pipetă. Preparat din diluția serică rezultată este necesar (vezi. P. 164).
Al doilea ingredient (parte) pentru reacția de setare este diagnosticum m. E. O suspensie de bacterii ucise. Pregătirea diagnosticum prin adăugarea la un fenol suspensie microbiană la o concentrație de 0,25-0,5% sau formalină într-o concentrație de 0,2-0,3%.
Aglutinarea aglutinare a pus într-o eprubetă mică (diametru 0.9-1 cm, lungime 10 cm). Utilizarea de tuburi 6-10, în funcție de diluții de ser de reacție necesare. Deoarece aglutininele normale detectată la diluții de ser scăzute, rezultatele de reacție includ la diluții mai mari de cel mai mic de 1: 50-1: 100. La fiecare tub conținând ser la o anumită diluare se adaugă 1-2 picături de suspensie bacteriană și se amestecă bine prin agitare conținutul flacoanelor au fost plasate în termostat timp de 2 ore la 37 ° C, apoi se lasă la temperatura camerei până a doua zi.
Concomitent cu experiență în exact aceleași condiții pozeze control, adică. E. Se toarnă într-un tub separat 1 ml de soluție salină (fără ser), la care se adaugă 1-2 picături de aceleași suspensii bacteriene, pentru a se asigura că cultura în sine Ea nu se încadrează în suspensie sub formă de bulgări (fenomen nespecific - aglutinarea spontană).
Un rezultat pozitiv al reacțiilor de aglutinare caracterizate printr-o transparență mai mare sau mai mică de fluid și precipitarea microbilor pe fundul tubului. Cu un rezultat negativ, fluidul își păstrează aspectul omogen inițial.
Character aglutinare m. E. rezultată tip aglutinează poate fi variată. Formarea de flocoane mari depuse pe fundul tubului, este krupnohlopchatoy tipic (H) aglutinare, care apar ca urmare a aderenței celulelor bacteriene prin intermediul flageli, și are loc în decurs de 2 ore, în eprubete într-un incubator.
O-aglutininele determina legarea corp mikrobvyh dând granulat compact precipitat captuseala fundul tubului. Fină granulată (O) -agglyutinatsiya mai lent și numărate după 24 de ore (după 2 ore ședere în incubator și 18-20 de ore de incubare la temperatura camerei).
Interpretarea rezultatelor obținute cu ochiul liber atunci când citirea krupnohlopchatoy H-aglutinare și cu o lupă sau detectarea unei seroscopy granulație fină O-aglutinare. Gradul de reacție pozitivă este notat cu sistemul chetyrehkrestnoy:
a) (+ ++ +) - lichid transparent în tuburi, sedimente foarte mare sub forma unei umbrele - agglyutinatsiya- full
b) (+ + +) - lichidul este aproape transparent, un sediment semnificativ - aproape complet agglyutinatsiya-
c) (++) - fluid opac, precipitat mic - agglyutinatsiya- slab
g) (+) - lichid opac precipită ușor, abia perceptibil la glazom- gol sub agitare poate fi văzut boabe de cereale sau un Lupă sau seroscopy - urme observate de aglutinare.
reacția aglutinare este utilizată în diagnosticul febrei tifoide (reacția Widal), bruceloza (reacția Wright) și alte boli.
Determinarea tipului de microb de aglutinare. test de aglutinare, de asemenea, face posibilă determinarea naturii unui microb necunoscut și astfel un diagnostic. În acest caz, o cultură pură a unui microb care urmează să fie determinată este supusă unui studiu paralel diverse seruri aglutinant de diagnostic. Pentru a arma testul de aglutinare în determinarea microb necunoscut necesită un set de aglutinare seruri de specii diferite. Serurile de stoc trebuie să fie întotdeauna disponibile în laborator. Aceste seruri sunt preparate Institutul bacteriologic. Sera sunt disponibile în formă uscată cu simbolul corespunzător pe etichetă (numele, titlul, termenul de valabilitate).
Preparată seroaglutinare imun prin imunizarea animalelor (iepuri, cai). Pentru imunizarea tipic selectat antigenic bine tulpinile aglutinante microb corespunzătoare.
Pentru a identifica microorganismele care au mai multe tipuri serologice, se prepară ser (monoretseptornye) tip specific. Pentru acest tip de anticorp grup de seruri extrase, saturarea le microbii secvențial înrudite care adsorb aglutinele nespecifice. Atunci când se lucrează cu o astfel de seruri pot restricționa aglutinare pe un diapozitiv, fără a recurge la eprubetele aglutinare liniar expandat.
performanțele privind echipamentul dislocat testul de aglutinare în determinarea tipului de microb este după cum urmează. Trepiedul set 10 tuburi (Tabelul 1), a 9 Tubul este controlat de ser, 10 - controlul antigenului. Pentru reacția dintre următoarele componente sunt necesare: 1) aglutinant diagnostic syvorotka- 2) soluție salină soliton sodiu 3) antigen - un germene izolat dintr-un material pacient uman (sânge, fecale, urină, etc) ....
studiu înclinării cultură zilnică sau de 20 de ore se clătește cu 5 ml de soluție salină sterilă, și microbi nămolul rezultat transferate într-un tub curat. Reacția este plasată într-un volum de 1 ml.

                    
Tabelul 1
Setarea schema de reacție de aglutinare utilizate pentru a determina tipul de microb (agglutinates titrului
ser 1: 12 800)
eprubetă

Acesta este preparat printr-o serie de diluții de ser. După cum se poate observa din schema, soluția salină este turnată în toate tuburile cu excepția 1 și 9-lea, serul, diluat 1: 100 (0,1 ml ser + 9,9 ml ser fiziologic, soluție), se toarnă doar în 1, 2 și tubul 9a.
Conținutul celui de al doilea tub se amestecă bine și 1 ml a fost transferat în al treilea tub din al treilea 1 ml a fost transferat într-un 4-lea și t. D., și de la 8 minute a fost scos 1 ml.
Astfel obținute diferite diluții de seruri de la 1: 100 la 1: 12800. In fiecare tub cu excepția de control 9 minute, 1-2 picături de luare de suspensie microbiană.
Tuburile au fost agitate bine și pus pe un termostat de 2 ore, după înregistrarea prealabilă. Tuburile au fost apoi lăsate timp de încă 18-20 ore la temperatura camerei, pentru o contabilitate finală. Intensitatea reacției este notată cu semnul (+), ca în formularea unei reacții de aglutinare cu serul pacientului.
Aglutinarea pot fi considerate specifice numai atunci când are loc controlul complet perfect, adică. E. Dacă, în absența serului de adeziune microbiană corespunzătoare. Ser de control dau pentru a exclude posibilitatea formării de fulgi de mai zer. La evaluarea rezultatelor aglutinare de diluție grad mare importanță ser care dă în continuare un rezultat pozitiv, iar viteza de reacție, de exemplu. adică. timpul scurs de la începutul experimentului, până fulgi. Componența microbului la un anumit tip pot fi luate în considerare în cazul în care el a aglutina titru seric specific sau diluat până la jumătate titrului.
aglutinare Estimat. În cazul în care diagnosticul bacteriologic de febră tifoidă, dizenterie, holeră și alte boli au recurs la stabilirea indicativ de aglutinare. Pentru aceasta se aplică pe un ser aglutinare sticlă pipetă Pasteur picătură la o diluție de 1: 10 sau 1: 20 și următoarea - o picătură de soluție salină pentru a controla. Apoi, fiecare picătură de buclă, o cantitate mică de cultura microb și se amestecă bine pentru a obține o suspensie omogenă de bacterii. După câteva minute într-o picătură de ser apare bacteria clusterizare sesizabile accelerând sticlă la agitare. picătură de control rămâne uniform turbiditate (Fig. 56).

Fig. 56. aglutinare pe sticlă.
aglutinare indicative utilizate pentru a determina tipul de microb în alocarea de medii de cultură nete în petri Geidenreich Petri. Pentru aglutinare folosind colonie, care este fabricat din subcultură pe agar înclinat, pentru setarea ziua următoare neambalată aglutinarea (liniar). Astfel, o aglutinare indicativ poate accelera formulare diagnostic, care este apoi confirmată prin epruvetă de aglutinare macroscopica,