Germeni Respirația - microbiologie cu tehnica testelor microbiologice

Video: 01. Andrey Shestakov. Microbiotei umane ...

viata microbiana, la fel ca toate ființele vii, este legată de cheltuielile neîncetată de energie, și, prin urmare, pentru a menține echilibrul fiziologic are nevoie de reînnoire constantă a rezervelor sale. Acestea din urmă se realizează folosind microorganisme din procesul respirator.
Spre deosebire de plantele superioare si animale proces de respirație în microbi, în ciuda mărimii lor microscopice, caracterizată prin complexitatea și diversitatea sa, care se bazează pe acțiunea diferitelor enzime. În funcție de tipul de organisme de respirație sunt împărțite în trei grupe:

1. aerobic obligã, în curs de dezvoltare numai cu acces liber de oxigen. Procesul de respiratie au efectuat implica oxigen molecular în aer (de exemplu, Vibrio cholerae).
2. obligã anaerobi care pot trăi numai în absența oxigenului atmosferic (de exemplu, tetanos bacilul).
3. anaerobi facultativi, care include marea majoritate a patogen mikroorganizmov- ele pot exista în absența oxigenului din aer, și cu acces limitat la acesta.

Pasteur mai întâi s-a descoperit că unele microorganisme se pot dezvolta în absența oxigenului pentru a obține energia necesară dezintegrarea substanțelor organice complexe ale substratului nutritiv. Procese de clivaj compuși organici cu azot liber adânci, care se bazează în general respirația anaerobă numita fermentație. Procesul catalizatorilor aerobe și anaerobe de respirație efectuate biologice (enzime), care sunt capabile să activeze în timpul respirației în timpul reacțiilor de oxidare. În respirație aerobă și anaerobă în prima fază a procesului este marcat activarea enzimelor din grupul dehidrogenazelor de hidrogen care iau hidrogen din substratul (mediu de cultură) și se transferă de la o moleculă organică la drugoy- de la unul la altul acceptor (lat. Acceptor- detectare). Și din moment ce structura atomului de hidrogen pe orbita de electroni, există una, procesul de retragere a hidrogenului din substratul este o oxidare. În ultima fază, la respirație aerobă aerobic dehidrogenaza care transmite jefuiți de hidrogen substrat oxigen atmosferic direct, care este acceptorul final. Aceasta poate forma peroxid de hidrogen, care acționează ca un oxidant al compușilor organici. Enzima catalaza este disponibil pentru toate organismele aerobe, descompune peroxidul de hidrogen în apă și oxigen, iar enzima peroxidaza activeaza oxigenul peroxid.
dehidrogenaze anaerobă nu poate da oxigen atmosferic, hidrogen, și se transferă la un alt acceptor (enzime alte substanțe apar în procesul de fermentație).
Ca și în condiții aerobe și respirația anaerobă are loc, oxidarea și recuperarea unor alte substanțe.
Rezumatul oxidării constă în pierderea de electroni oxidabile substanță și are loc în reducerea reducerii aderenței electronilor de substanțe.
Astfel, respirația acționează microorganismele sunt o serie de procese redox consecutive care conduc la eliberarea de energie necesară pentru viața lor.
Produsele cele mai disponibile pentru oxidarea microbi aerobe sunt zaharuri, alcooli și acizi organici. compuși azotați complexe sunt utilizate pentru ultima suflare. microbii anaerobe sunt utilizate ca substratul compus și minerale substanțelor organice oxidabile.

respirația anaerobă este mai puțin eficientă decât aerobic, așa cum se poate observa din exemplul următor. În procesul de digestie aerobă a unei molecule de zahăr de struguri eliberat 674 de calorii de căldură. (SbN120b + 602 = 6N20 + 6S02 + 674 calorii) și descompunerea anaerobă în aceeași moleculă - doar 27 de calorii (C6Hi206 = 2C2H50H + 2C02 + 27 calorii).
Notă. Tipul de organisme de respirație se reflectă în caracterul lor de creștere pe medii artificiale. De exemplu, Bacillus tubercul, ca aerobă obligatorii, într-un tub de testare sau într-un balon cu bulion nutritiv crește numai superficial într-un film, lăsând bacilii mediu transparent, anaerob - numai Pridonya și bacteriile de grup tifoidă enteric (anaerobi facultativi) cresc în mod egal în toate straturi bulion, dând naștere difuză.
Tehnici de cultivare anaerobi. Pentru cultivarea bacteriilor anaerobe, în plus față de mediile de cultură corespunzătoare, trebuie să se creeze condiții de mediu fără oxigen. Metode de bacterii anaerobe de cultură sunt multe. În conformitate cu principiile pe baza acestor metode pot fi împărțite în chimice, fizice și biologice.
Metode chimice. Există două metode de cultivare a anaerobi. Prima metodă constă în aceea că tuburile inoculate anaerobe sau ceștilor amplasate într-un spațiu închis (de exemplu, exicator) si da un absorbant de oxigen - hiposulfit de sodiu și soluție de pirogalol alcalină. La 1 g de pirogalol iau 10 ml dintr-o soluție 10% din această cantitate substanță NaOH- capabilă de a se lega de oxigen într-un volum de circa 200 ml de aer.
Cele mai simple metode de anaerobioză folosind acest amestec după cum urmează:

1. Tampon de bumbac dop cu semănatul culturii de cultură și este coborât și mai adânc umectată cu o soluție (0,5 1 ml). accesul aerului este oprit de etanșare cu un dop de cauciuc sau un capac de cauciuc.

1. Metoda Buchner. tuburi de cultură au fost plasate într-un tub test special Buchner (Fig. 40) sau într-un tub de testare cu o gâtuire (cartof), în cazul în care pre-toarnă 1 g de pirogalol, apoi se toarnă perete pipeta soluție de NaOH 10 ml 10%, iar flaconul a fost etanșat cu un dop de cauciuc.
2. microbii Cutura în mass-media în petri Geydenrsyha - feluri de mâncare sunt special concepute exsicator. Plăcile au fost plasate pe un suport metalic sau într-un pahar de sticlă. soluție pirogalol turnată alcalină avans este turnat prin pâlnie, apoi închideți capacul sigilat cu argilă sau încastrate în parafină.
   
   Fig. 40. Tub Buchner pentru cultivarea anaerobilor.
   În a doua metodă, se adaugă la substanțele medii de cultură care intră reductoarelor sunt oxigen. Astfel de substanțe includ acid piruvic, cisteină, glucoza, glicină și altele. În acest caz, posibila dezvoltare a anaerobilor accesarea oxigenului molecular din aer.
   Metode fizice.
   
   Fig. 41. anaerobă.

Video: Bacteriile 1959

1. Eliminarea aerului din mediul de cultură înainte de însămânțare în baie de apă care fierbe timp de 15 minute, urmată de o răcire rapidă până la 45-50 °. Pentru a nu permite aerului să intre din nou miercuri, tubul este etanșat sau suprafața mediului este umplut cu ulei de parafină sterilă.
2. Prepararea colonii izolate în straturile profunde ale mediului printr-o metodă Vignal. mașini de semănat prin metoda Vignal este după cum urmează: 3-4 tub de topit agar face însămânțarea materialului de testat cu diluarea graduală a acestuia. Solidificat încă agar după inoculare din fiecare tub câștig în pipete Pasteur, care sunt apoi sigilate numai cu capătul trase-out (nu ține când etanșarea materialului pentru a evita stropirea cu capătul opus prinse). Tubul este rapid răcit și transferat într-un termostat. 2-3 zile cu un material sursă de reproducere de succes se poate observa colonii individuale.

Pentru a izola coloniile în locul dorit pe fișierul incizie tub, după care tubul este ușor de rupere. În acest moment conținutul este turnat în steril petri Geidenreich - Petri colonie ia buclă sau trase trase într-o pipetă fină și transferată într-un bulion sau într-un agar injecție zahăr coloană.

1. Eliminarea aerului (și, prin urmare, oxigen) în mediul mecanic. Pentru a face acest lucru, utilizați dispozitive speciale - anaerobă (Figura 41.). Anaerobic în forma sa cea mai simplă este o cutie metalică dreptunghiulară sau cilindrică, un capac care poate fi închis pe garnitura de cauciuc. Cilindrul este echipat cu un robinet de metal, care aderă la pompă. Tuburile și cupa este plasat în interiorul cu culturi, aerul pompat pompa. Pentru cultivarea anaerobilor stricte suficient de a reduce presiunea la 1 mm.

Metode biologice. Metode biologice este cel mai des folosit infectarea animalelor și metoda Fortner.
Când infectarea animalelor utilizate materialul administrată animalului în amestec cu antiser specific. Această metodă poate fi utilizată în două moduri:

1. Pentru a izola microorganisme din amestec. În cazul în care un microb ser corespunzător, el moare. Alți microbi, de asemenea, nu corespunde unui anumit ser extras din animal.
2. Pentru a determina toxinele. În prezența toxinei animalului materialul de testat au primit în amestec cu ser antitoxic supraviețuiește. Controlul animal moare. Un astfel de diagnostic este utilizat pe scară largă în proba biologică la toxina.

Metoda Fortner. Această metodă aduce echipamentul de laborator la condițiile naturale ale dezvoltării microorganismelor anaerobe. Fortner aplicat metoda simbioză microbi aerobe capabile să absoarbă puternic oxigen din aer, cu anaerobii inoculate pe agar de sânge în cupă Geidenreich (Bact prodigiosum.) - Petri. Cupa este împărțită în două părți de bandă de agar tăiate pentru a preveni creșterea în timpul culturilor de amestecare continue. Pe de o jumatate de cana însămânțată analizate pentru anaerobilor materialul de pe celălalt - aerob evident cunoscut obligatorii (Bact prodigiosum subtilis Sas, etc ....).
Pentru izolarea spațiului interior al paharului de marginea exterioară a atmosferei este umplut cu ceara sau sigilate cu plastilină. Metoda Fortner poate obține o creștere bună suprafață de anaerobi.
Mediul nutritiv pentru cultivarea anaerobilor. Bouillon Kitta - Tarotstsi. Tubul conținând bulion de carne-peptonă, a adăugat bucăți de ulei vaseline fierte și se spală cu apă clocotită pe o sită de ficat (3,5 g per tub) sau carne tocată, se toarnă și se sterilizează la 115 ° timp de 30 minute.
Agar-sange cu glucoza (Tseysslera). Agar alcalin conținând slab de 3,2% agar și 2% glucoză, turnat într-un tub mare de test (lungime de 25 cm și 2,5 cm în diametru), circa 60 ml fiecare și se sterilizează 30 minute la 110 ° C și, ca atare, păstrează. Înainte de utilizare, agarul topit într-o baie de apă, se răcește la 45 °, în fiecare eprubetă se adaugă 12-15 ml de sânge defibrinat steril, se amestecă și se toarnă în 3-4 vase Petri Geidenreich. A terminat cupe înainte de semănat ținute timp de 2 zile la temperatura camerei.
Tuburi Agar Veyona. Pentru a deschide vatra bulion se adaugă 2% agar și 0,5% glucoză. pH ajustat 7,4, este turnat în tubul îngust (diametru 0,3-0,5 cm, lungime 20 cm). Coloana agar nu trebuie să fie mai mare decât 2/3 din lungimea tuburilor și sterilizate prin fractionare 3 zile, la un aparat 40 de minute tekucheparovom.