Apendicele 2 - criptosporidioză și HIV

Groși frotiurilor de fecale proaspete uscat în aer pentru a împinge prin soluție auramină fenol, se clătește cu apă și se colorează rapid (5-10 minute) într-o soluție de fucsin carbolice. După spălare cu apă, uscat la aer și investigat folosind un microscop cu fluorescență (de preferință cu un sistem de imersiune).
Rezultate: oochisturi au un fel de disc puternic fluorescentă, în mod clar vizibile pe un fundal roșu închis.

IV. Metode de îmbogățire: flotație și sedimentare.

Ca fluide de flotație folosind soluții saturate de clorură de sodiu sau zaharoză, o soluție saturată de sulfat de zinc (331 g NSO₄.7H₂O dizolvată în 1 litru de apă de la robinet). Flotația este de asemenea utilizat pentru mediu Breza (un amestec de soluții saturate de sulfat de magneziu și tiosulfat de sodiu și apă de la robinet într-un raport de 3: 3: 1) amestec Pavleseka (clorură de zinc - 220 g de clorură de sodiu - 210 g, robinet de apă 800 ml), etc. .

1. Flotația cu centrifugare.

Centrifugarea accelerează procesul de flotație a ouăcistelor și permite să se spele materiile fecale, minimizând astfel contaminarea detritus sau a unui preparat de grăsime. Când spălarea de fecale lor diluată cu apă, nu un lichid de flotație, și se filtrează într-un tub de centrifugă de 15 ml. Materialul de testat trebuie centrifugate timp de 1-2 min la 2-3 mii. Rot / min și 3-4 min la 1500 rot / min. După primul (spălătură) centrifugarea supernatantul a fost îndepărtat, iar volumul de sediment rămas nu trebuie să depășească 1 ml. Adăugați lichid jumătate de tub de flotație volum și resuspenda pelete în ea printr-o pipetă cu un balon de cauciuc sau baghetă de sticlă. Apoi se toarnă lichidul de flotație la marginea superioară a tubului și centrifugat din nou în același regim au rezultat concentrat oocyst în suprafața stratului de lichid. Materialul din acest film pentru a colecta de metal sau sticlă capilare buclele, aplicate pe sticla glisant pentru a fixa amestecul colorant Nikiforov și o metodă adecvată, și apoi supuse microscopie.

Video: Pentru a fi sincer cu privire la un singur lucru: Primele semne ale infecției cu HIV

2. Metode. Sedimentare

utilizat în mod tipic de sedimentare eter, care trebuie să fie 0,5-1,0 g fecale amestecate cu 10-12 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu. Temeinic suspensie agitată de tulpină prin 2 straturi de tifon într-un tub de centrifugă de 15 ml. Precipitatul a fost clătit de două ori cu o soluție izotonică prin centrifugare, apoi cu atenție resuspendate în soluție de formalină 10 ml 10%, se adaugă 3 ml de eter, și pre atenție peremeshat- stopper tub închis. Amestecul rezultat a fost centrifugat timp de 2 minute, la 1 mie. Rev / min. Ester, resturile de suprafață și de scurgere formalina și care rămâne pe fundul tubului pentru a face frotiuri precipita și pata una dintre metodele descrise anterior.

În metoda modificată, 0,5 ml de materii fecale lichide sedimentare eterice amestecate cu 3 ml de soluție de formol 10% și se amestecă până la o suspensie omogenă. Se adaugă 30 ml eter etilic și cu grijă mișcați de agitare, apoi se adaugă soluție de formol 15 ml de 10%, se amestecă și se filtrează amestecul rezultat prin cheesecloth într-un tub de centrifugă. Capătul pipetă cu un balon de cauciuc cu grijă (fără a atinge pereții tuburilor) sub straturile inferioare eter și detritus, să sugă coloana inferioară de lichid și se transferă într-un alt tub. Noul tub umple cu 10% soluție de formalină și a fost centrifugat timp de 10-15 min. cu 3 mii. rot / min (durata centrifugării este proporțională cu viscozitatea soluției) din precipitat pentru prepararea frotiurilor și colora cu una dintre metodele convenționale.

V. Bioîncercările la șoareci

Pentru a pune un biotest este necesară pentru a alimenta cantități mici de fecale nou-născuți sau șoareci albi de 2-5 zile. În prezența oochisturi în probele de fecale la șoareci după 5-8 zile vor fi detectate oochisti. Odată cu deschiderea șoarecilor în perioada anterioară (optim zilele 3-7-lea), în preparate intestinale histologice (de preferință, în preparatele ileon) vor fi identificate dezvoltare endogenă etapa cryptosporidium, localizate în zona de frontieră perie.

În formularea biotestare animale pot adăuga antibiotice fecale (penicilina, omogenatul streptomicină, gentamicină), care inhibă microflora însoțitoare, dar nu au nici un efect asupra invazivitatea oochisturi.

Numărul de oochisturi numărate folosind camera Goryaev utilizate în practica hematologică. După incubare, permițând oochisti excizare, poate în același mod și se calculează numărul de sporozoiți.

Pentru determinările cantitative pot conta, de asemenea, numărul total de oochisturi în frotiurilor de sânge colorate preparate din anumite cantități de materii fecale (de exemplu, 0,2 g).

Video: Plague Inc Evolved - # 2 - Moartea vine din nord

Editat de profesorul Frolov VM
MD Peresadin NA, profesorul SN Fedchenko, asistent Baklanov AV

Video: Nu! - video despre sex protejat (2)