Izolarea Chlamydia - Chlamydia in obstetrica si ginecologie

Video: simptome Chlamydia la femei

Izolarea Chlamydia în culturi celulare

separat pentru uretra si colul uterin - tampoane special concepute sunt utilizate pentru a captura materiale. Materialul este plasat într-un tub de testare cu mediu de transport. Tuburile și mediul care nu sunt destinate transportului de probe pot fi toxice pentru celule, iar acest lucru poate duce la rezultate fals negative. Mediul de transport poate fi păstrat la temperatura camerei timp de 1 zi la temperatura de 4 ° C -lună, la -20 ° C - 4 luni.

materiale luate trebuie menținută la 4-6 ° C și în decurs de 24 de ore la laborator, proba proptit gheață. Studiul presupune păstrarea Chlamydia vii, de aceea este important să se respecte temperatura modul de livrare de material.

Liniile de celule McCoy, folosite, L-929, HeLa-920. linii de celule, de obicei, mai multe pasaje în decurs de 5-7 zile, 3-4 zile schimbare de mediu. Celulele au fost îndepărtate din sticlă cu o soluție de Versene sau Tripsină (0,02% și respectiv 0,25%). Monostratul cultivarea suspensiei de celule pe coverslips preparate 2,0x10 densitate, se pune în tuburi plate plasate în partea de jos a capacului alunecare. Acesta poate fi folosit în acest scop panouri din plastic, cu micro sonde cu fundul plat. Monostratul se formează tuburi verticale la 37 ° C timp de 24 ore.

După îndepărtarea mediului de cultură, celulele cultivate sunt infectate cu material infecțios din mediul de transport într-un volum de 0,5 ml și centrifugate într-o centrifugă cu un rotor orizontal la 2500 rot. / Min timp de 1 oră. După aceea, inoculul a fost îndepărtat, tuburile sau puțuri de luare medii de întreținere 199 cu ser bovin 5%, sau ser fetal bovin, soluție de glucoză 5%. 0,9-1,0 ug / ml cicloheximidă și antibiotice (100 ug / ml gentamicină, 100 ug / ml vancomicină și 25 mg / ml amfotericină B).

La 48 de ore după infectare cu coverslips monostrat este scos din eprubete, se usucă cu aer și fixate în acetonă rece. Alte acțiuni respectă pe deplin cu medicamente de tratament pentru imunofluorescență directă.

Răsfoiți produse la microscop cu fluorescență face posibilă pentru a vedea luminos verde a chlamydia microcolonii intracelulare pe un fundal portocaliu citoplasmă.

Atunci când o cantitate mică corpurile elementare în materialul de incubare pe termen lung a culturilor infectate a fost crescută la 3-5 zile, în unele cazuri, produc pasaje r. E. Infectarea culturi proaspete ale fazei lichide și celulele de cultură primară. Laboratoarele de diagnostic folosesc rar pasaje din cauza strângerii excesive a emite un răspuns.

metoda de alocare C. trachomatis în culturi de celule este foarte sensibilă și specifică, dar vă permite să găsiți agenți patogeni viabile. Totuși, această metodă este de 10-15% din cazuri pot da răspuns fals negative.

Rezultatul analizei este dată în 5-7 zile. VARIANTE DE REALIZARE răspuns emiterea în diagnosticul de cultură: "Metoda de cultură a evidențiat C. trachomatis". "metoda de cultură C. trachomatis nealocat". "Studiul din nou, din cauza efectului citopatic".

Video: infecția cu Chlamydia la femei